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目的:通过检测大鼠血清CK、CK-MM水平,腓肠肌Pax7、NICD、RBPJ-K、COLV、CalcR蛋白表达情况,观察推拿对EIMD大鼠损伤干预疗效,探究Notch/CollagenV/CalcR轴在推拿干预EIMD模型大鼠MSC微环境中的作用机制。方法:将72只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为C组(空白对照组)、E组(单纯造模组)、T组(造模推拿组),根据取材时相分为即刻组、12h、24h、48h亚组,采用“一次性大负荷离心运动”造模,T组从造模后即刻予以推拿,并在相应时相再给予一次推拿干预(参数:力度400±50g,10min/次,60次/min)。观察大鼠一般情况,HE染色观察组织形态学,电镜观察超微结构,ELISA法检测血清CK、CK-MM 含量水平,Western Blot 法检测肌组织 Pax7、NICD、RBPJ-K、COLV、CalcR蛋白表达。采用SPSS19.0统计软件进行数据处理。结果:1.大体情况观察:造模组(E组、T组)大鼠运动能力下降,呼吸不匀,部分四肢出现肿胀,造模结束后,运动能力均有所恢复,T组优于E组。2.组织形态学观察:即刻至48h,E组肌原纤维排列紊乱,炎性细胞浸润逐渐加重,至48h达峰值,T组肌原纤维排列紊乱,炎性细胞浸润,至24h达峰值,T组各时相恢复均优于E组。3.超微结构观察:即刻至48h,E组肌原纤维排列紊乱,线粒体肿胀逐渐加重,至48h达峰值,T组肌原纤维排列紊乱,炎性细胞浸润,至24h达峰值,T组各时相恢复均优于E组。4.CK、CK-MM含量水平:E组、T组大鼠血清CK、CK-MM水平均于即刻达到峰值,随时间延长,逐渐下降,到48h接近C组水平,T组比E组下降明显。5.Pax7表达结果:(1)组内分析:即刻至48h,C组表达稳定,E、T组逐渐上升,至48h最高。(2)组间分析:E、T组各时相Pax7表达明显高于C组,T组高于E组,且C、E、T组三者间均存在差异显著(P<0.05)。6.Notch/CollagenV/CalcR轴相关蛋白表达结果:(1)NICD表达情况:①组内分析:即刻至48h,C组NICD表达轻微下降,E、T组于即刻达峰值,后下降,E组24h趋于稳定,T组48h仍有下降。②组间分析:E、T组NICD表达明显高于C组,E组居于首位。即刻、12h、24h时,C、E、T组间差异显著(P<0.05);48h时,与C组相比,E、T组升高差异显著(P<0.05),与E组相比,T组下降无显著差异(P>0.05)。(2)RBPJ-K表达情况:①组内分析:即刻至48h,C组RBPJ-K表达轻微上升后下降,E、T组于即刻达峰值,随后下降,24h时趋于稳定,48h轻微下降。②组间分析:E、T组各时相蛋白表达明显高于C组,E组居于首位。即刻时,与C组比,E组升高差异显著(P<0.05),T组升高差异不显著(P>0.05),与E组比,T组下降无显著差异(P>0.05);12h、24h、48h时,C、E、T组间差异显著(P<0.05)。(3)COLV表达情况:①组内分析:即刻至48h,C组CollagenV表达先下降后上升,E组即刻至12h下降明显,后上升,T组即刻至12h有轻微下降后上升,均于48h达峰值。②组间分析:C组CollagenV表达明显高于E、T组,T组高于E组。即刻时,与C组比,E、T组下降差异显著(P<0.05),与E组比,T组升高无显著差异(P>0.05);12h、24h时,与C组比,E、T组下降差异显著(P<0.05),与E组比,T组上升差异显著(P<0.05);48h时,与C组比,E组下降差异显著(P<0.05),T组有轻微下降,无显著差异(P>0.05);与E组相比,T组升高差异显著(P<0.05)。(4)CalcR表达情况:①组内分析:即刻至48h,C组CalcR表达稳定轻微升高,E组即刻至12h表达先上升后下降,T组持续下降。②组间分析:E组CalcR表达明显高于C组,即刻、12h、24h时E组高于T组,48h时T组高于E组。即刻、12h、24h时,与C组相比,E、T组升高差异显著(P<0.05),与E组相比,T组升高无显著差异(P>0.05);48h时,与C组相比,E组升高差异显著(P<0.05),T组有轻微下降,无显著差异(P>0.05);与E组相比,T组差异显著(P<0.05)。结论:(1)推拿可以促进一次性大负荷离心运动诱发大鼠EIMD模型中肌原纤维排列恢复,降低线粒体肿胀程度,使血清CK、CK-MM下调至正常水平,有效改善损伤症状。(2)大鼠骨骼肌损伤后Pax7表达上升,提示MSC启动增殖,且推拿组较为显著且持续至48h,推拿对MSC激活增殖有促进作用。(3)在推拿干预EIMD过程中,Notch/CollagenV/CalcR轴通过调控肌肉干细胞微环境中不同时相NICD、RBPJ-K、COLV、CalcR的表达,保持微环境状态,维持MSC功能发挥,促进受损骨骼肌纤维的修复和再生,维护骨骼肌细胞正常结构与功能稳定。