【摘 要】
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目的:探讨不同浓度二妙散（EMS）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠脾脏和关节中免疫调控基因Gnαq表达的影响,为临床靶向治疗RA及应用经方二妙散治疗RA提供实验基础。方法:通过建立CIA大鼠模型,对符合标准的雌性Wistar大鼠进行灌胃治疗,72只大鼠为（42±2）日龄、健康状况良好、且体重相近（160±10 g）,随机分为6组,I组,健康组（Con,n=12）:饲喂基础日粮+水;II组,CIA组
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目的:探讨不同浓度二妙散（EMS）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠脾脏和关节中免疫调控基因Gnαq表达的影响,为临床靶向治疗RA及应用经方二妙散治疗RA提供实验基础。方法:通过建立CIA大鼠模型,对符合标准的雌性Wistar大鼠进行灌胃治疗,72只大鼠为（42±2）日龄、健康状况良好、且体重相近（160±10 g）,随机分为6组,I组,健康组（Con,n=12）:饲喂基础日粮+水;II组,CIA组（CIA,n=12）:多点皮下注射牛II型胶原;III组,甲氨蝶呤对照组（MTX,n=12）:CIA造模成功后,予以甲氨蝶呤腹腔注射,剂量为0.9 mg·kg-1,1周1次;IV、V、VI组,低(1.5 g·kg-1)、中(3.0 g·kg-1)、和高浓度(4.5 g·kg-1)二妙散组（L-ems、M-ems、H-ems,n=12）:分别灌胃CIA大鼠,甲氨蝶呤作为阳性对照组。3周后,麻醉后脱颈处死,采用ELISA检测各组大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,分别采用q RT-PCR和Western blotting技术分析大鼠脾脏和关节中Gnαq mRNA和蛋白水平表达,免疫组化技术对大鼠脾脏和关节组织中Gnαq定位。结果:（1）Masson染色结果显示,CIA组较Control组,大鼠关节中出现了明显的炎症和组织破坏的关节炎特征。与CIA组相比,MTX组和不同浓度EMS组大鼠关节破坏及组织增生减轻,MTX组和1.5 g·kg-1EMS组大鼠关节炎特征及组织增生较MTX组和1.5g·kg-1EMS组治疗效果较明显。说明本实验成功构建CIA大鼠模型,二妙散治疗CIA大鼠最佳浓度是1.5 g·kg-1。（2）不同实验组大鼠血清中炎症因子存在差异（P<0.01）。与Control组相比,CIA组血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达极显著升高（P<0.01）。与CIA组相较,MTX组和不同浓度EMS组血清中IL-1β（除H-ems组）、IL-6和TNF-α的表达极显著降低（P<0.01）。与L-ems组相比,IL-1β的表达（极）显著低于M-ems和H-ems组（P<0.05,P<0.01）,IL-6的表达（显著）低于M-ems和H-ems组（P<0.05）;TNF-α的表达显著低于M-ems组（P<0.05）,与H-ems组的表达差异不显著（P>0.05）。（3）不同实验组大鼠脾脏和关节中Gnαq mRNA和蛋白水平表达结果显示,Gnαq在不同的实验组大鼠的脾脏和关节中均有不同程度的表达。CIA组大鼠脾脏和关节中Gnαq mRNA和蛋白的表达极显著高于健康组（P<0.01）。CIA组大鼠脾脏和关节中Gnαq mRNA和蛋白的表达显著高于不同浓度EMS组和MTX组（P<0.05）。1.5 g·kg-1EMS组大鼠脾脏和关节中Gnαq表达量（极）显著低于3.0和4.5 g·kg-1EMS组（P<0.01,P<0.05）。进一步说明Gnαq可能通过介导炎性因子的形成和发展,参与了CIA大鼠炎症反应的形成。。（4）免疫组化结果显示,不同实验组大鼠脾脏和关节组织中均可检测到不同程度的阳性信号。CIA组脾脏和关节中Gnαq的表达均极显著高于健康组（P<0.01）;不同浓度EMS组大鼠脾脏和关节中Gnαq的表达（极）显著低于CIA组（P<0.01,P<0.05）;1.5 g·kg-1EMS组脾脏和关节中Gnαq的表达（显著）低于3.0和4.5 g·kg-1EMS组（P<0.05）;这与mRNA和蛋白水平检测结果一致,说明EMS可能通过抑制Gnαq的表达,进而减轻RA的发生和发展。结论:本实验初步证实Gnαq参与CIA大鼠炎性反应的形成,介导类风湿关节炎炎性因子的形成和发展;不同浓度二妙散均可抑制炎性因子和Gnαq的表达,二妙散最佳作用浓度是1.5 g·kg-1。二妙散可能通过调控RA调控基因Gnαq的表达,进而抑制RA的发生和进展;本实验可为临床靶向治疗RA及应用经方二妙散治疗RA提供实验基础。
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