植物在其整个的生长发育过程中极易受到周围环境的影响,通过病原体灰霉菌(Botrytis cinerea)引起的番茄灰霉病是危害番茄(Solanum lycopersicum)生产的主要因素之一。所以研究灰霉侵染番茄相关的抗病和感病分子机制尤为重要。本论文在前期研究中发现在灰霉菌侵染的番茄叶片中,mi R482a(sly-mi R482a)的表达发生变化。为了进一步认识sly-mi R482a的功能,我们利用分子生物学技术、细胞生物学技术及基因工程技术等对sly-mi R482a在影响番茄的生长发育和灰霉菌耐受性方面展开深入地研究,取得主要研究结果如下:1、利用荧光定量PCR技术,我们发现在番茄根、茎、叶、花和果实中,slymi R482a在花和果实中的表达丰度远远高于其他三个组织,此外,我们还发现在番茄叶片中,灰霉菌的侵染能上调sly-mi R482a的表达。以上结果表明mi R482a是一个双功能基因,既涉及植物花和果实的发育调控,也参与植物对灰霉菌的免疫应答调控。2、为了进一步了解sly-mi R482a响应灰霉的机制,我们将灰霉菌接种于过表达sly-mi R482a的转基因拟南芥和转基因番茄上。结果发现,与野生型相比,转基因拟南芥和番茄的叶片表面均出现更大的病变面积,并且台盼蓝染色和荧光定量PCR结果也显示灰霉菌菌丝在转基因植物中增殖更快,说明了sly-mi R482a的过表达增加了植物对灰霉菌敏感性。3、sly-mi R482a的靶基因主要为抗性蛋白编码基因,且在过表达sly-mi R482a的转基因拟南芥和转基因番茄叶片中的表达显著下降,与sly-mi R482a的表达呈负相关,表明sly-mi R482a通过靶向抗性蛋白来降低植物对灰霉菌的免疫。4、在过表达sly-mi R482a的转基因拟南芥中出现延缓抽薹和结实率下降的表型,在转基因番茄中也出现了结实率下降的表型,表明mi R482a负调控植物的花发育或果实发育;文献表明sly-mi R482a的一个靶基因——果胶酸裂解酶基因能正调控植物花或果实的发育,表明sly-mi R482a很可能通过靶向果胶酸裂解酶,进而延缓植物的花和果实的发育。本研究利用过表达sly-mi R482a的转基因拟南芥和番茄材料探讨了slymi R482a在拟南芥和番茄抵抗灰霉菌侵染中的作用,揭示了sly-mi R482a在灰霉菌应答时通过靶向solyc04g007320.1.1、solyc01g102920.2.1、solyc08g080850.2.1、At5g17680.1、At1g17600、At4g14610.1等抗性基因编码蛋白负调控拟南芥和番茄对灰霉菌侵染的抗性,并且通过负调控果胶酸裂解酶基因(solyc11g008140.1.1、At3g53190.1)延缓拟南芥和番茄中花和果实的发育。这些研究将为进一步了解sly-mi R482a的调控机制和灰霉菌的分子防治奠定基础。