基于UPLC/MS技术的白芍与赤芍代谢组学特征研究

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自古以来,芍药在医家的眼里一直是具有多种功效的传统中药,有赤、白之分。白芍与赤芍基源相近,主成分相同,经历代医家不断丰富赤、白芍各自的功用,逐渐重视两者的区别。现代药理学研究结果表明,白芍与赤芍具有保肝、抗炎、抗凝血、免疫调节等作用,两者之间既有区别又有联系,具有鲜明的中医药特色。   代谢组学主要应用生物质谱、多维色谱/质谱联用、生物信息学与计算机技术等研究生物体液中内源性代谢物在药物或毒物等影响下的变化情况,目前正被越来越广泛地应用于中医药研究的各个领域。   在前期对白芍与赤芍进行药理作用比较研究的基础上,本实验采用UPLC/MS方法分析白芍与赤芍给药后大鼠血清的代谢物指纹谱,使用多元模式识别方法分析给药组与正常组大鼠血清的代谢物差异,寻找与白芍与赤芍药理作用密切相关的潜在生物标记物,为深入探讨其作用的机理奠定基础。   1.通过长期连续给药方式,观察白芍与赤芍对大鼠血清代谢物的影响,结果表明白芍与赤芍组大鼠给药后第6天后血清代谢物即逐渐稳定,建议动物试验给药周期为6天,且连续眼眶取血方式对大鼠影响较小。白芍与赤芍可降低机体能量代谢,影响大鼠血清中α-酮戊二酸、苹果酸、丙二酸等多种代谢物的水平,为白芍与赤芍进一步的多种药理作用的代谢组学分析奠定了基础。   2.建立四氯化碳致大鼠急性肝损伤动物模型,观察赤芍和白芍的保肝作用,结果表明连续给予白芍与赤芍提取物6日后,能降低急性肝损伤大鼠血清ALT及AST水平,与模型组相比有显著性差异(P<0.01),且白芍组与赤芍组大鼠造模2h后血清代谢物即逐渐稳定。对大鼠血清中多种胆汁酸的定量分析结果表明白芍与赤芍可以改善腹腔注射四氯化碳后血清中多种胆汁酸的水平,对牛磺酸-熊去氧胆酸等8种胆汁酸的影响与血清生化指标ALT、AST结果显著相关,胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸-胆酸、去氧胆酸四种胆汁酸均可以做为评价白芍与赤芍抗四氯化碳所致急性肝损伤作用差别潜在的生物标示物。另外,白芍与赤芍能够降低胆碱和5-甲基四氢叶酸的水平,缓解高半胱氨酸的累积,减轻肝细胞损伤以及炎症反应。   3.建立角叉菜胶致大鼠足趾肿胀动物模型,观察白芍与赤芍的抗炎作用。结果表明白芍与赤芍提取物在0.5-1h对大鼠角叉菜胶致足趾肿胀均有较好的抑制作用,在2-3h仅赤芍提取物有较好的抑制作用。前列腺素F2α,前列腺素E3,白细胞三烯A4,前列腺素E2,谷胱甘肽等内源性生物标识物对于表征两者的抗炎作用具有重要的作用,且发现白芍与赤芍均可影响机体内前列腺素F2α和前列腺素E3的水平,但白芍与赤芍给药组间有显著性差异,提示二者发挥抗炎作用机制有一定差异。   4.建立大鼠抗血小板凝聚动物模型,观察白芍与赤芍对大鼠血小板凝聚功能的影响,结果表明连续给予白芍与赤芍能显著降低大鼠血小板最大凝集率水平,且白芍与赤芍组间有明显差别(P<0.01)。α-酮戊二酸、苹果酸、白细胞三烯A4、前列腺素E2、前列腺素F2a,等内源性生物标识物对于表征白芍与赤芍的抗血小板凝聚作用具有重要的作用。
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