猪囊尾蚴病是危害最为严重的人畜共患寄生虫病之一，该病不仅造成巨大的经济损失，而且具有重要的公共卫生学意义。人不仅是中间宿主，而且是唯一的终末宿主。囊尾蚴常在脑、眼、心脏等重要器官寄生，其中以寄生于神经系统的脑囊虫病引起的临床症状最为严重，极大危害了人类健康。研制简便、快速、准确的诊断力一法及诊断试剂己成为当前国内外专家攻克该病工作的重点。本研究的目的是，制备稳定产生抗猪囊尾蚴头节抗原的杂交瘤细胞株及相应单抗，鉴定细胞株的生物学特性，建立了特异、准确检测猪囊尾蚴头节蛋白双抗体夹心ELISA法，并进行了初步应用。方法：采用SephadexG-200层析纯化猪囊尾蚴头节，用猪囊尾蚴头节抗原免疫BALB／c小鼠4次，每次免疫间隔2周，融合前三天猪囊尾蚴头节抗原尾静脉注射进行攻击。取免疫脾细胞与骨髓瘤细胞株Sp2／0，用50％聚乙二醇PEG融合，HAT培养基选择培养出融合细胞。建立间接ELISA方法，初筛分泌抗猪囊尾蚴头节抗体的融合细胞，有限稀释法克隆化培养获得稳定分泌单抗的阳性杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞株细胞注入BALB／c小鼠腹腔，制备腹水，采用饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水，SDS-PAGE凝胶电泳鉴定McAb纯度；间接ELISA测定单抗的效价；采用间接法ELISA进一步鉴定了mAb的特异性，用猪囊尾蚴头节蛋白免疫新西兰白兔制备抗猪囊尾蚴头节血清以SAS沉淀法纯化IgG。用纯化的抗猪囊尾蚴头节的单抗与多抗，建立单抗—多抗双夹心ELISA法，检测不同稀释浓度的猪囊尾蚴头节蛋白，确定检测的敏感性；检测与猪囊尾蚴囊液、囊壁的交叉反应性，确定检测的特异性。结果：经细胞融合、HAT选择培养、抗体检测筛选、克隆化培养得到三株稳定分泌抗猪囊尾蚴头节单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为2C6、3A5和4G10，细胞株稳定性较好，体外连续传30代、液氮中冻存3个月后复苏测定，细胞株仍可稳定分泌单抗。腹水型单抗中，2C6效价较高达1：6.4×10~4，3A5和4G10效价达1：1.6×10~3、1：3.2×10~3。除2C6分泌的单抗的Ig类别为IgG1外，其余均为IgG2a。双抗体夹心法采用一株抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体(2C6)为包被抗体，以识别和结合待检标本中的猪囊尾蚴头节抗原，兔抗猪囊尾蚴头节多抗可与头节蛋白分子的另外表位结合，后加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的山羊抗兔IgG作为酶标抗体，并催化底物显色，根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本中的头节蛋白含量，建立了猪囊尾蚴头节的双抗体夹心ELISA法。标准品中头节蛋白含量在1ng／mL—10μg／mL范围内，浓度对数与其OD490nm，值呈线性关系。此方法具有快速、灵敏、特异的特点。