第一部分第一节：高风险草酸钙结石的代谢评估检测方法—离子色谱法同时检测尿草酸和枸椽酸目的：建立离子色谱法同时检测尿中草酸和枸椽酸,并测定40例无结石健康人24小时尿液草酸和枸椽酸量。方法：采用ICS-90离子色谱仪,流动相35mMNaOH,流速为1ml/min,浓硫酸作为再生液,室温20±5℃,高压输液泵的压力维持在2000±300psi,色谱柱Lon Pac AS23(4×250mm),保护柱Lon Pac AG23(4×50mm)。尿样稀释50倍,过滤后进样15μL。并测定40例国人无结石正常人24小时尿液草酸和枸椽酸量。结果：尿液样品中草酸和枸椽酸分别在6分钟和11分钟左右出峰,与周围峰分离完全。草酸在0.05-3.2mg/L的范围内,线性关系良好r2=0.9999,枸橼酸在0.25～16mg/L的范围内线性关系良好r2=0.9999。草酸和枸椽酸的批间、批内准确度和精密度都符合要求。40例健康人24小时尿草酸含量为33.94±8.29mg/d,尿枸椽酸含量为297.55±86.59mg/d。结论：该方法快速、准确、灵敏度高,可用于结石病因研究。我国健康人目前枸椽酸含量可能低于国外标准。第二节：高风险草酸钙结石患者代谢评估的结果目的：通过完整的代谢评估研究我国高风险草酸钙结石患者的病因。方法：自2010年3月至2010年10月,对在南京鼓楼医院就诊的66例(男性55例,女性11例)高风险草酸钙结石患者进行代谢评估。包括血液检查和24小时尿液分析,血液检查有肾功能电解质、甲状旁腺素,24小时尿液分析包括：尿钙、草酸、枸椽酸、尿酸、磷、钾、钠、肌酐、尿量。结果：患者尿钙、尿草酸、尿枸椽酸和尿酸均值分别为305.50±153.52mg/d、50.00±18.94mg/d、240.83±177.94mg/d和403.81±130.27mg/d。65例(98.5%)患者发现代谢异常,低枸椽酸尿、高钙尿和高草酸尿是主要代谢异常,分别占75.8%、72.7%和54.5%。且同一患者可合并多种代谢异常,10(15.2%)例患者有一种代谢异常,38例(57.6%)患者有两种代谢异常,15例(22.7%)患者有三种代谢异常,2例(3.0%)患者有四种代谢异常。结论：我国高风险草酸钙结石患者的主要代谢异常是低枸椽酸尿、高钙尿和高草酸尿,且多数患者存在多种代谢异常。国人高草酸尿和低枸椽酸尿比率均高于西方国家。第二部分摄钙依赖性高草酸尿的假说和验证目的：检测尿液中草酸量在不同摄钙水平下的变化,验证“摄钙依赖性高草酸尿”假说。方法：自2010年3月至2010年9月,共58例门诊就诊的草酸钙结石患者加入本研究。检测患者随机饮食下的尿钙和尿草酸含量。患者限钙饮食一周,检测其24小时尿液中尿钙和尿草酸量。发放元素钙180mg(葡萄酸钙片),嘱患者恢复正常饮食一周后开始服用,连续服药三天后,检测24小时尿样中钙和草酸量。结果：患者在随机饮食、限钙饮食和加钙饮食下尿钙量分别为317.42±157.04mg/d、277.94±127.78mg/d和337.75±153.82mg/d,草酸量分别为49.81±19.97mg/d、48.03±22.98mg/d和50.16±30.85mg/d。与随机饮食下尿钙量相比,限钙饮食后明显下降(P=0.008),加钙饮食后尿钙上升,但无统计学意义(P>0.05)。三种摄钙条件下尿草酸均无明显变化(P>0.05)。根据性别、尿钙水平及尿草酸水平进行分组,均未发现尿草酸发生变化。结论：在我国居民摄钙水平下,适量的限钙饮食和药物增加少量钙摄入,不会影响尿草酸的排泄量。“摄钙依赖性高草酸尿”假说仍需进一步验证。第三部分尿羟乙酸检测技术的建立目的：建立离子色谱检测尿羟乙酸的方法。方法：采用ICS-90离子色谱仪,流动相10mM四硼酸钠,流速为1ml/min,室温20±5℃,高压输液泵的压力应维持在2000±300psi,色谱柱Lon Pac AS23(4×250mmm),保护柱Lon Pac AG23(4×50mm)。尿样稀释10倍,过滤后进样15μL。结果：尿液中羟乙酸峰约在10分钟左右出现,与周围完全分离,仅12-15分钟即可完成。批间、批内精密度和准确度都符合要求,最低可以检测0.8mg/L浓度的羟乙酸,正常检测时将尿液稀释十倍。尿样在4℃保存一周后仍可准确测定。结论：离子色谱法检测尿羟乙酸快速、准确、灵敏度高。