目的：应用酵母双杂交技术筛选胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的结合蛋白，以进一步了解其功能。构建带GFP标签的重组胞内氯离子通道蛋白2(CLIC2B)的表达载体，为以后的研究奠定基础。 方法：以含有人CLIC1全长cDNA序列的质粒pACT2-CLIC1为模板，采用PCR方法扩增CLIC1基因，插入到pGBKT7载体中，限制性内切酶酶切图谱分析及测序证实获得构建正确的重组质粒pGBKT7-CLIC1。将pGBKT7-CLIC1转化入酵母菌株AH109中，观察CLIC1是否有自身激活活性，再将人Hela细胞eDNA文库转入选择的酵母细胞，在SD/-Leu/-Trp/X-α-gal盘上筛选α-gal活性为阳性的克隆。提取阳性克隆的质粒，电转化法转入大肠杆菌(E.coli)TG1中，常规方法抽提质粒并用特定的限制性内切酶酶切，选取有插入片段的质粒测序，将测序结果作BLAST检索。将检索为已知蛋白的质粒与pGBKT7-CLIC1共转化AH109细胞，证实二者是否存在相互作用。 以质粒pACT2-CLIC2B为模板，用PCR方法扩增CLIC2B全长序列，扩增产物与T载体连接，构建克隆载体pUCm-T-CLIC2B。用限制性内切酶酶切重组质粒，回收目的片段CLIC2B，插入带GFP标签的载体pCDGFP中构建表达载体pCDGFP-CLIC2B。用限制性内切酶酶切图谱分析及DNA序列分析两种方法鉴定构建的质粒。 结果：酶切鉴定得到构建正确的重组质粒pGBKT7-CLIC1，pGBKT7-CLIC1在AH109细胞中没有自身激活活性。将筛选到的16个阳性克隆测序，测序结果经BLAST检索发现有4个为已知蛋白的基因。经限制性内切酶酶切图谱分析及DNA序列测定证实pCDGFP-CLIC2B的构建是正确的。 结论：成功构建了重组质粒pGBKT7-CLIC1；利用酵母双杂交技术筛选到了4个CLIC1的结合蛋白，为CLIC1的功能研究提出了新线索；成功构建了带GFP标签的表达载体pCDGFP-CLIC2B。