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目的:
建立稳定的乳鼠心肌细胞原代培养方法,提高心肌细胞纯度。
研究对象与方法
选择1-3天龄的Wistar大鼠12只,雌雄不拘,由中国医科大学附属盛京医院实验动物中心提供。采用联合酶消化法提取心肌细胞,差速贴壁1.5h联合应用5-BrdU进行心肌细胞纯化,用台盼蓝染色法检测心肌细胞活性,倒置显微镜下进行心肌细胞形态学观察,采用免疫荧光染色进行心肌细胞纯度检测。
结果:
台盼蓝染色提示心肌细胞存活率均大于95%,倒置显微镜下观察:培养24h时心肌细胞几乎完全贴壁,可见单个细胞搏动;48h时心肌细胞间交联成片并出现规律搏动;72h时经细胞免疫荧光检测心肌细胞纯度高达95%以上。
结论:
采用差速贴壁联合应用5-BrdU可获得高纯度的心肌细胞,是纯化心肌细胞的有效方法。