【摘 要】
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脂肪组织在肉用动物和人类疾病中发挥着重要的作用,它不仅可以贮藏能量,而且在免疫反应、调节胰岛素敏感性和维持体温等方面发挥作用。脂肪组织的组成和功能随着饮食组成而变化,精准调控猪皮下脂肪沉积可以提高胴体瘦肉率。近年来,因安全、易用性等优势,天然产物衍生的小分子化合物在畜牧生产上具有广泛的应用前景。乔松素（Pinocembrin,Pino,PB）属于二氢黄酮类,已有研究表明乔松素具有良好的抗炎、抗肿瘤
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.31872979）; 陕西省重点研发计划项目（No.2022ZDLNY01-04）; 国家生猪产业技术体系专项（CARS-35）; 国家重点研发计划项目（No.2021YFF1000602）
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脂肪组织在肉用动物和人类疾病中发挥着重要的作用,它不仅可以贮藏能量,而且在免疫反应、调节胰岛素敏感性和维持体温等方面发挥作用。脂肪组织的组成和功能随着饮食组成而变化,精准调控猪皮下脂肪沉积可以提高胴体瘦肉率。近年来,因安全、易用性等优势,天然产物衍生的小分子化合物在畜牧生产上具有广泛的应用前景。乔松素（Pinocembrin,Pino,PB）属于二氢黄酮类,已有研究表明乔松素具有良好的抗炎、抗肿瘤、抗氧化、降低血脂和神经保护作用。但由于小分子具有多靶点的特性,乔松素对脂肪组织的作用及其机制仍需探索。本研究以高脂饮食C57BL/6J肥胖小鼠、猪皮下脂肪细胞和3T3-L1细胞为研究对象,运用分子生物学技术和生物信息学技术,结合网络药理学分析乔松素对脂肪沉积的作用,通过免疫荧光、实时定量、蛋白质免疫印迹和分子对接等实验方法探究乔松素对脂肪沉积的作用机制。本研究主要获得以下结果:1.利用关联性图谱数据库（Connectivity Map,CMap）,鉴定乔松素有潜在调控脂肪沉积作用;进一步文本挖掘分析和功能富集分析发现乔松素与脂肪酸合成,胰岛素等信号通路密切相关。2.乔松素预防高脂饮食（High Fat Diet,HFD）诱导的肥胖,改善高脂饮食引起的葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗。连续灌胃10周,乔松素预防高脂饮食诱导的脂肪组织重量的增加,同时抑制附睾脂肪组织和腹股沟脂肪组织成脂标志基因PPARγm RNA和蛋白表达,促进脂肪水解基因ATGL m RNA和蛋白表达（P＜0.05）。3.乔松素抑制前体脂肪细胞增殖。在3T3-L1细胞上,Ed U检测、CCK 8实验表明100μmol/L乔松素显著抑制3T3-L1脂肪细胞增殖（P＜0.05）;同时降低Pcna、Cyclin E和Cdk4基因m RNA表达,上调p27 m RNA表达（P＜0.05）;Western Blot检测发现100μmol/L乔松素上调P27蛋白水平（P＜0.05）,降低CDK4蛋白水平（P＜0.05）。在猪皮下脂肪细胞上,CCK 8和Ed U检测表明,200μmol/L乔松素显著抑制猪皮下脂肪细胞增殖（P＜0.05）;同时与DMSO组相比,降低Cyclin E和p27的m RNA表达（P＜0.05）;Western Blot检测发现P21蛋白水平表达有上升的趋势,CDK4蛋白水平有下降的趋势。4.乔松素促进前体脂肪细胞分化。75μmol/L和100μmol/L乔松素分别促进3T3-L1细胞和猪皮下脂肪细胞分化聚酯。油红O染色、Adipo Red和Bodipy染色表明乔松素促进前体脂肪细胞分化;乔松素促进PPARγ、CEBPβm RNA表达（P＜0.05）,抑制HSL m RNA表达（P＜0.05）。5.乔松素通过GPR120通路促进前体脂肪细胞分化。分子对接发现乔松素与GPR120结合口袋结合,其结合自由能为-7.661 kcal/mol;同时Adipo Red和实时荧光定量PCR结果表明75μmol/L乔松素可恢复GPR120抑制剂AH7614对3T3-L1细胞分化的抑制作用。综上所述,本研究从离体和活体两方面探索乔松素在活体和细胞水平的不同作用,并揭示了乔松素通过GPR120信号通路从而促进前体脂肪细胞分化,而在活体水平上预防高脂饮食诱导的肥胖及相关症状。本研究为生猪生产中的肉质改良和开发新型饲料添加剂提供思路和理论依据。
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