合欢皮(Cortex Albizziae)为豆科植物合欢(Albizzia julibrissin Durazz)的干燥茎皮。其味甘，性平。有安神、活血、消痈的功能。在传统医学中用于失眠、肺脓疡、痈肿、折伤疼痛等疾病的治疗。现代药理学研究表明，皂苷为合欢皮的主要有效成分，具有广泛的生理活性和药理作用。本实验室前期研究结果显示:合欢皮总皂苷(Albizzia julibrissin saponin，AJS)能显著促进卵清蛋白(OVA)和禽流感鸡痘病毒载体活疫苗(rFPV-HA)免疫小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答，具有免疫佐剂活性。同时，在以佐剂活性指标为导向下，采用大孔吸附树脂柱色谱进一步分离，从中筛选得到主要的有效部位——合欢皮皂苷佐剂活性部位(Albizzia julibrissin saponin adjuvant-active fraction，AJSAF)。然而，由于大孔吸附树脂法能有效地去除提取物中的糖类、鞣质和淀粉等杂质，但对色素的去除不理想。因此，经大孔吸附树脂纯化得到的AJSAF虽然总皂苷含量达到了有效部位新药含量的要求，然而，因含有大量色素，样品颜色较深，外观性状不佳。为此，进一步采用D941弱碱性阴离子交换树脂进行AJSAF脱色工艺条件与参数的研究，制备得到近白色的精制AJSAF，即AJSAF50和AJSAF70。为了评价离子交换树脂脱色工艺对AJSAF的佐剂活性的影响，本实验以禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rL-H5)为抗原，Quil A为阳性对照，通过检测免疫小鼠脾细胞增殖反应、脾细胞经抗原特异性刺激后培养上清中细胞因子含量、以及血清中特异性IgG抗体及其亚类IgG1、IgG2a和IgG2b的效价，比较了AJSAF脱色前后的佐剂活性。在此基础上，进一步以仔猪为本动物，评价精制AJSAF对猪伪狂犬病弱毒疫苗的佐剂作用，为合欢皮皂苷作为疫苗佐剂的开发研究提供依据。　　 1.合欢皮皂苷活性部位对禽流感-新城疫重组二联活疫苗的免疫佐剂作用　　 以Quil A为佐剂对照，合欢皮皂苷活性部位AJSAF、AJSAF50和AJSAF70分别联合商品禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rL-H5)皮下注射免疫小鼠。采用ELISA和MTT方法检测免疫小鼠Con A、LPS和H5抗原诱导的脾细胞增殖反应、脾细胞经H5抗原特异性刺激后培养上清中细胞因子含量以及血清中特异性IgG抗体及其亚类IgG1、IgG2a和IgG2b的效价，比较了AJSAF脱色前后对rL-H5疫苗的佐剂作用。结果表明:AJSAF、AJSAF50和AJSAF70不仅能显著提高rL-H5疫苗免疫小鼠血清中H5抗原特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体效价，而且能显著促进Con A、LPS和H5抗原特异性抗原诱导的免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应，以及脾细胞经H5抗原特异性刺激后分泌细胞因子TNF-α、IL-2和IL-10的能力。这些结果说明:AJSAF、AJSAF50和AJSAF70均能显著增强rL-H5疫苗免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫应答，能同时诱导免疫小鼠Th1和Th2免疫反应，对禽流感疫苗具有佐剂作用，进一步证实了合欢皮皂苷的佐剂作用。同时，脱色后的精制AJSAF保留了原有的佐剂活性，说明前期研究确定的D941弱碱性阴离子交换树脂对AJSAF进行脱色的工艺条件与参数是合理的。研究结果不仅证实了精制AJSAF的免疫佐剂活性，阐明了其佐剂作用的特点，为合欢皮皂苷作为疫苗佐剂的开发研究提供科学依据。　　 2.合欢皮皂苷活性部位对猪伪狂犬病弱毒疫苗的佐剂作用研究　　 在猪伪狂犬病野毒gE-抗体阴性的猪场选用42～44日龄大长仔猪80头，随机分成4组，每组20头。猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗（清伪灵）每头份分别用专用稀释液、不同浓度的精制AJSAF稀释液(1.25、2.5、5.0 mg/ml)各2 ml稀释，颈部肌内注射免疫，分别在免疫前及免疫后每隔二周前腔静脉采血制备血清，以ELISA试剂盒检测了免疫前后猪血清中猪伪狂犬病病毒gB抗体(PRV gBAb)水平，评价AJSAF对猪伪狂犬病弱毒疫苗的佐剂作用。结果表明:精制AJSAF可显著提高猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗免疫猪血清中PRV gB抗体水平，说明AJSAF对猪伪狂犬病活疫苗有显著的佐剂作用。量效研究结果显示:AJSAF低、中、高三个剂量免疫猪血清中PRV gB抗体水平呈剂量依赖性升高(P＜0.01或P＜0.001)，以高剂量的佐剂作用最佳。这些结果为AJSAF作为猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗的佐剂进行临床实验和推广应用奠定了基础。