阿特拉津降解菌Arthrobacter sp. C2的分离鉴定、降解特性和机理

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阿特拉津自从上世纪50年代投入生产使用以来,常年位居除草剂生产销售榜首,近年来,发现它具有内分泌干扰物的作用后,许多发达国家都已经明令禁用,但阿特拉津由于用量少、成本低和高效广谱的优点,仍然在世界范围内深受发展中国家农民的追捧。因为阿特拉津具有较高的水溶性和较低的土壤吸附系数,所以它很容易通过地表径流和淋溶等方式进入地表水和地下水循环系统,进而造成全球范围性质的生态效应。阿特拉津具有一定的内分泌干扰作用,对藻类、鱼类、两栖类包括人类都能造成一定的生殖危害,因此探究阿特拉津污染的高效修复方式具有重要意义,本文从阿特拉津污染的土壤中分离得到一株阿特拉津高效降解菌,探究它的降解特性及降解机理,并对其修复阿特拉津污染的效果进行初步评价,结果如下:本试验从受阿特拉津严重污染的玉米田中通过富集培养法筛选分离到一株能以阿特拉津为唯一营养源的高效降解菌C2,其在含有10μg/ml阿特拉津的无机盐培养基中生长状况良好,在培养第三天时能将无机盐培养基中的阿特拉津降解90%以上,培养至第五天后生长速度变缓,至第九天时达到最大生长量。通过电镜观察以及16Sr DNA序列分析,将分离株C2鉴定为节杆菌属(Arthrobacter sp.)分离株C2在无机盐培养基中降解阿特拉津的主要影响因素是底物浓度、pH值和温度。不同底物浓度对降解菌C2的降解效果影响不大,在培养三天时均能将阿特拉津完全降解。在100μg/ml浓度下C2的降解效果最好,不同底物浓度处理的降解速率从快到慢依此为:100μg/ml>10μg/ml>1μg/ml。而酸碱度和温度对C2菌株的降解阿特拉津影响效果差异较大,在pH5.0(30℃,10μg/ml,150rpm)条件下,五天内阿特拉津降解了10%,没有降解效果,不同pH值处理的降解速率从快到慢依此为:pH7.0>pH9.0>pH5.0。在40℃(10μg/ml,pH7.0,150rpm)条件下,五天内阿特拉津降解了22%,与对照相比无明显降解效果,不同温度处理的降解速率从快到慢依此为:30℃>20℃>40℃。综合所有考虑因素降解菌株C2在30℃,pH7.0条件下拥有最好的降解效果。分离株C2对阿特拉津的降解方式主要包括脱烷基和水解,其降解产物包括了阿特拉津脱烷基和一系列水解产物,经过质谱分析推断阿特拉津降解产物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别为羟基阿特拉津、N-异丙基氰尿酸一酰胺、三聚氰酸和脱异丙基羟基阿特拉津。降解菌C2不能将三聚氰酸进一步降解,这与许多研究节杆菌属降解阿特拉津机理得出的结果基本吻合。毒理试验表明降解菌C2对阿特拉津污染具有修复作用。水培实验表明,与添加阿特拉津处理组相比,添加阿特拉津和降解菌C2的处理中小麦的株高、根长、鲜重和干重分别增加了50%、49%、58%、30%;土壤解毒试验表明,与添加阿特拉津的处理相比较,添加了阿特拉津和菌株C2的处理对小麦株高、根长、鲜重和干重分别增加了47%、73%、156%、64%,和空白对照的相关指标基本一致。试验结果表明降解菌株C2可以有效削弱阿特拉津对小麦的抑制。
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