川崎病急性期血浆中差异表达microRNAs的筛选及可能的作用机制

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liyan2006
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第一部分川崎病患儿急性期血浆中差异表达microRNAs的筛选研究  目的:利用microRNA(miRNA)微阵列芯片技术筛选川崎病(Kawasaki disease, KD)急性期血浆中差异表达的miRNAs,发现与川崎病血管炎症相关的miRNAs,进一步探讨KD血管炎症的发生机制。  方法:选取苏州大学附属儿童医院就诊的急性期KD患儿6例,及健康儿童6例作为对照,清晨抽取空腹血,分离血浆,提取血浆中总RNA,采用miRNA芯片杂交技术检测川崎病组及正常对照组血浆中差异表达的miRNAs。再选取急性期KD患儿及健康儿童各8例,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)技术验证芯片结果。利用TargetScan, PITA和microRNAorg三个数据库对差异miRNAs进行靶基因预测,使用DAVID生物信息学分析软件对共同的靶基因进行GO和KEGG分析,寻找与KD血管炎症相关的靶基因。  结果:miRNA芯片在KD急性期血浆中筛选到7个显著上调的miRNAs(hsa-let-7b-5p, hsa-miR-223-3p, hsa-miR-4485, hsa-miR-4644, hsa-miR-4800-5p, hsa-miR-6510-5p和hsa-miR-765)和3个显著下调的miRNAs(hsa-miR-33b-3p, hsa-miR-4443和hsa-miR-4515)。结合RT-qPCR验证结果,发现hsa-miR-223-3p表达显著性上调与芯片结果一致。靶基因预测分析共获得415个共同的靶基因,使用DAVID软件分析发现与炎症有关的靶基因共7个,分别为IL6ST、F3、SMAD1、HDAC9、NLRP3、EPHA3和HHEX。  结论:结合芯片技术与RT-qPCR技术我们获得KD急性期血浆中差异表达的miRNAs。hsa-miR-223-3p可能参与了KD血管炎症的病理生理过程。  第二部分川崎病血浆中hsa-miR-223-3p的表达与IL-6水平的相关性研究  目的:分析hsa-miR-223-3p和IL-6在KD中的表达及其临床意义,并探讨hsa-miR-223-3p与IL-6之间的关系。  方法:选择30例KD患儿,其中冠状动脉损伤者10例,非冠状动脉损伤者20例。发热及正常对照组各12例。采用RT-qPCR技术检测KD急性期和亚急性期血浆中hsa-miR-223-3p的表达量,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血浆中IL-6水平,比较各组间差异,并分析hsa-miR-223-3p与IL-6的相关性。  结果:  1. KD组急性期血浆hsa-miR-223-3p的表达量显著高于对照组(p<0.05);KD冠脉损伤组hsa-miR-223-3p的表达量显著低于KD无冠脉损伤组(p<0.05)。KD组亚急性期血浆hsa-miR-223-3p的表达量明显减少,与对照组间差异无统计学意义(p>0.05)。  2. KD组急性期血浆IL-6水平明显高于对照组(p<0.05);KD冠脉损伤组IL-6水平明显高于KD无冠脉损伤组(p<0.05);KD组亚急性期血浆IL-6水平明显减少,与对照组间差异无统计学意义(p>0.05)  3. KD急性期患儿血浆中hsa-miR-223-3p表达量与IL-6水平呈负相关。  结论:  1. hsa-miR-223-3p在KD血管炎症中可能具有保护作用,急性期血浆中低水平的hsa-miR-223-3p可能是冠状动脉损害的高危因素。  2. IL-6的过多表达可能参与了KD患儿血管炎症损伤机制。  3. hsa-miR-223-3p可能通过抑制靶基因IL6ST的转录后表达,进一步抑制IL-6/STAT信号通路活化,从而减轻KD的血管炎症反应。
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