ARTP诱变黑曲霉絮凝菌株及应用研究

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微生物絮凝剂因具有无毒、高絮凝性、绿色环保等优点而受到国内外研究者广泛关注,但生产过程中菌株性能差、易退化、筛选困难、培养基成本过高而使其商业化受到限制。常温室压等离子(ARTP)诱变菌株具有诱变快、操作简易、遗传稳定等优势,可用于诱变微生物筛选高产絮凝菌株。目前我国马铃薯淀粉生产废弃物排放随意已造成严重的环境污染,淀粉废水属于无毒害的有机营养废水,将其优化作为絮凝微生物发酵培养基具有可行性,同时制备絮凝剂处理马铃薯废水,从而降低成本减少环境污染,创造更多的经济价值。本文以常压室温等离子体(ARTP)技术对黑曲霉Aspergillus niger xj菌株进行诱变处理,主要通过液体培养基摇瓶初筛、复筛和遗传稳定性来筛选絮凝正突变菌株,通过对比研究出发菌株与突变株的絮凝活性能力、生长状态、遗传稳定性、生长环境耐受性,从而筛选出优质突变菌株。以实验室模拟制备的马铃薯淀粉废水为基础培养基,优化发酵条件培养优质突变菌株,制备絮凝剂絮凝处理马铃薯淀粉废水,结果如下所示:1、通过ARTP技术诱变黑曲霉xj的最佳诱变照射时间为90s,摇瓶培养初筛得到具有絮凝活性的4 16株诱变株,复筛后获得2株絮凝活性较高、生长状态良好、遗传稳定的突变菌株A90-34与A90-37,其对高岭土悬液的絮凝率分别为94.12%和94.96%,与原始菌株相比,分别提高26.19%、27.03%,连续传代7次仍具有良好的遗传稳定性,絮凝率维持在92%~95%。2、菌株对于环境耐受性结果表明絮凝菌株的最适碳氮源分别为葡萄糖和尿素,对高浓度葡萄糖阶段性耐受,尿素浓度超过或低于1.5gL时絮凝活性变化极为敏感,NaCl的浓度超过1%,环境温度高于32℃,pH值低于5时菌株絮凝活性能力开始下降,在不同培养环境中正突变菌株均表现出比出发菌株较好的絮凝活性和环境耐受能力。3、以模拟制备的马铃薯淀粉废水为基础培养基,采用不灭菌方式发酵,通过响应面优化废水培养基条件,生产絮凝剂处理马铃薯淀粉废水。实验验证搅拌转速为130rmin、温度30℃、接菌量4mL、pH值7、葡萄糖浓度为25 gL,尿素浓度投加量为1.5 gL时最佳,絮凝处理淀粉废水的絮凝率为91.48%,与理论的值92.19%基本符合,比未优化前提高了32.45%。每制备一升絮凝剂,废水培养基比PDA培养基可节约67.99%的成本,实验证明以马铃薯废水培育黑曲霉产絮凝剂絮凝处理淀粉废水具有一定的可行性。
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