【摘 要】
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用基因工程技术把外源基因导入植物细胞是现代遗传育种的重要途径。经过二十多年的研究已建立了多种基因转化系统,获得了很多有价值的转基因植物。目前的转基因技术可分为物
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用基因工程技术把外源基因导入植物细胞是现代遗传育种的重要途径。经过二十多年的研究已建立了多种基因转化系统,获得了很多有价值的转基因植物。目前的转基因技术可分为物理法、化学法及生物学法。这些方法各有其优点,但也都有不足之处,这就推动新的转基因技术的出现。利用植物分生组织直接进行基因转化,由于不经过愈伤组织诱导培养过程,体细胞无性系变异小,能较好地保持受体植物的遗传稳定性,转化的外源基因也能实现稳定地遗传。本文首先以河套蜜瓜腋芽生长点做外植体,利用SPSS软件对农杆菌转化时的菌液浓度、转化时间、共培养时间设计16组正交实验。做法如下:切取河套蜜瓜腋芽茎段,用灭菌的细针刺伤腋芽萌发处,用带有外源基因的农杆菌进行转化处理。然后将腋芽萌发的茎段切下来,转到生根培养基上后获得转基因再生植株。对16组实验进行数据分析,得到农杆菌转化河套蜜瓜生长点的最优体系为:使用OD600=0.7的菌液转化10min之后,黑暗中共培养2d。在后期筛选转基因植株时选定:叶片上喷洒20 mg/L庆大霉素,诱导嫩茎和生根培养基中加入40 mg/L庆大霉素进行筛选。利用优化的转基因体系转化河套蜜瓜腋芽生长点,转化后阳性率达到76%,幼苗成活率为76.3%。在优化了的转基因体系的基础上,用农杆菌AGL1将植物表达载体pAMS-CTR1和pAMC-CTR1转入到河套蜜瓜茎顶端生长点中,分别转化50个植株,转化植株经PCR检测,分别获得35和34株转基因阳性植株,转化率达到70%和68%。
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