背景社区获得性肺炎(Community-Acquired Pneumonia,CAP)指在医疗机构外罹患的肺炎,属呼吸系统常见疾病,发病率及病死率均较高。脓毒症(Sepsis)是由宿主对感染的免疫反应失调而引起一种危及生命的器官功能障碍,是CAP严重并发症之一,与其不良预后密切相关。对CAP患者并发脓毒症进行早期预测、早期干预可改善其预后,但目前临床上对CAP并发脓毒症的风险预测手段非常有限。因此寻找CAP并发脓毒症的预测因子意义重大,免疫调控相关的细胞与分子具有极大的预测潜力。文献报道脓毒症发病过程中调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)及其表面分子PD-1水平发生改变;树突状细胞(Dendritic cells,DC)数量、亚群比例及表面分子CD80、CD86及PD-L1的水平也发生变化,炎症介质如TNF-α、IFN-γ及IL-6也参与了脓毒症免疫紊乱的过程。中性粒细胞/淋巴细胞比值(Neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)是临床上简便易得的指标,结合了中性粒细胞和淋巴细胞两类免疫细胞的数量水平信息,评估效能优于单项指标,但CAP并发脓毒症的早期,NLR是否发生改变,仍未有研究。本研究拟纳入CAP患者,根据SOFA评分判断患者是否并发脓毒症,并据此分为CAP组、CAP并发脓毒症组,纳入同时期健康体检中心志愿者作为对照组。入组24h内抽取静脉血后流式细胞术检测Treg数量及表面分子PD-1表达水平,DC数量、亚群比例及表面分子CD80、CD86和PD-L1表达水平,ELISA检测血浆炎症介质TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-10的水平。同时收集临床资料并计算入院NLR,研究以上指标的组间差异及相关性,藉此探索CAP并发脓毒症时免疫细胞数量及功能与肺炎病情严重程度的相关性,并作为CAP并发脓毒症的预测基础。材料与方法本研究纳入2018年7月至2020年1月期间收住于南部战区总医院呼吸内科及MICU且诊断为CAP的患者共30例,根据SOFA评分将其分为CAP组和CAP并发脓毒症组;同时纳入健康体检中心的10例志愿者作为对照组。本研究纳入的CAP患者中36.67%(11/30)并发脓毒症,63.33%(19/30)未并发脓毒症。CAP组共19例,其中男13例,女6例,平均年龄74.42±8.853岁;CAP并发脓毒症组共11例,其中男8例,女3例,平均年龄80.45±5.733岁;对照组10例,男7例,女3例,平均年龄72.60±7.947岁。3组研究对象的年龄、性别及基础疾病分布差异均无统计学意义。研究对象入院24h内采集血标本3-5ml,流式细胞术检测外周血Treg(荧光标记抗体选择APC-CD3、FITC-CD8、PE-Cy7-CD25、PerCP-Cy5.5-CD127,以 CD4+CD25+CD127dim/-为 Treg)比例及表面分子PD-1(CD279)表达水平,DC及亚群mDC、pDC(荧光标记抗体选择 FITC-Lin、PerCP-Cy5.5-HLA-DR、PE-CD11c、APC-CD123,其中 Lin-HLA-DR+为 DC,Lin-HLA-DR+CD123+为pDC,Lin-HLA-DR+CD11c+为 mDC)比例及表面分子CD80、CD86和PD-L1(CD274)表达水平;同时分离血浆,ELISA检测TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-10水平;另一方面,收集研究对象临床资料,记录入院24h内中性粒细胞绝对值(Neutrophil,N)、淋巴细胞绝对值(Lymphocyte,L)并计算NLR;最后对以上指标进行相关性分析。结果1.Treg占CD4+T细胞比例CAP并发脓毒症组入院24h内Treg占CD4+T细胞比例高于CAP组(P=0.003)和对照组(P=0.004)。2.Treg表面分子PD-1的表达CAP并发脓毒症组入院24h内Treg细胞表面分子PD-1表达百分比高于CAP组(P=0.000)和对照组(P=0.000)。3.DC、mDC及pDC的数量及比例CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内的外周血DC占PBMC 比例分别为 0.41±0.261(%)、0.52±0.369(%)、0.53±0.217(%),三组之间差异无统计学意义(P=0.568)。CAP并发脓毒症组入院24h内外周血pDC占DC 比例低于对照组(P=0.015);CAP并发脓毒症组低于CAP组,但差异无统计学意义(P=0.246)。CAP并发脓毒症组入院24h内外周血mDC占DC比例低于CAP组(P=0.000)和对照组(P=0.000)。CAP并发脓毒症组入院24h内的100μl全血中pDC个数少于CAP组(P=0.002)和对照组(P=0.026)。CAP并发脓毒症组入院24h内的100μl全血中mDC个数少于CAP组(P=0.003)和对照组(P=0.003)。CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内外周血mDC/pDC 比值分别为5.83±5.883、10.94±15.194、2.73±1.722,两两比较均无统计学意义。4.mDC表面分子CD80、CD86及PD-L1的表达CAP并发脓毒症组入院24h内的外周血mDC表面分子CD80表达百分比低于CAP组(P=0.000)和对照组(P=0.000)。CAP并发脓毒症组入院24h内的外周血mDC表面分子CD86表达百分比低于 CAP 组(P=0.000)和对照组(P=0.000)。CAP并发脓毒症组入院24h内的外周血mDC表面分子PD-L1表达百分比高于CAP组(P=0.000)和对照组(P=0.001)。5.pDC表面分子CD80、CD86及PD-L1的表达CAP并发脓毒症组入院24h内的外周血pDC表面分子CD80表达百分比低于CAP组(P=0.000)和对照组(P=0.000)。CAP并发脓毒症组入院24h内的外周血pDC表面分子CD86表达百分比低于CAP组(P=0.001)和对照组(P=0.002)。CAP并发脓毒症组入院24h内的外周血pDC表面分子PD-L1表达百分比高于CAP组(P=0.000)和对照组(P=0.000)。6.血浆 TNF-α、IFN-γ、IL-6 及 IL-10 浓度CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内血浆TNF-α浓度分别为81.39±62.882(pg/ml)、76.88±37.571(pg/ml)、66.26±36.008(pg/ml),三组之间差异无统计学意义(P=0.776)。CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内血浆IFN-γ浓度分别为104.09±70.497(pg/ml)、96.61±30.546(pg/ml)、87.54±30.850(pg/ml),三组之间差异无统计学意义(P=0.743)。CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内血浆IL-6浓度分别为43.46±41.943(pg/ml)、26.53±23.645(pg/ml)、18.37± 10.643(pg/ml),三组之间差异无统计学意义(P=0.180)。CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内血浆IL-10浓度分别为76.24±32.308(pg/ml)、99.30±73.750(pg/ml)、134.05±83.605(pg/ml),三组之间差异无统计学意义(P=0.212)。CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内血浆IL-10/TNF-α比值分别为1.64±1.500、1.71±1.681、2.20±1.521,三组之间差异无统计学意义(P=0.771)。CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内血浆IL-10/IFN-γ比值分别为1.00±0.720、1.20±1.076、2.16±1.928,三组之间差异无统计学意义(P=0.346)。CAP并发脓毒症组、CAP组及对照组入院24h内血浆IL-10/IL-6比值分别为2.19±1.732、5.81±5.506、9.34±8.170,三组之间差异具有统计学意义(P=0.036)。两两比较时,均无统计学意义。7.N、L及NLR水平CAP并发脓毒症组入院24h内的N高于对照组(P=0.005),CAP组高于对照组(P=0.002);CAP并发脓毒症组高于CAP组但差异无统计学意义(P=0.158)。CAP并发脓毒症组入院24h内L低于CAP组(P=0.026)及对照组(P=0.006)。CAP并发脓毒症组NLR高于CAP组(P=0.012)和对照组(P=0.002)。8.相关性分析Spearman’s相关分析显示,研究对象总体的NLR水平与外周血Treg占CD4+T细胞百分比呈正相关(r=0.611,P=0.000),与pDC占DC百分比呈负相关(r=-0.546,P=0.000),与 mDC 占 DC 百分比呈负相关(r=-0.333,P=0.036),与 IL-6 没有相关性(r=0.150,P=0.355)。结论CAP并发脓毒症患者入院24h内的外周血Treg 比例增高且表达PD-1增高;mDC及pDC数量减少,表面分子CD80及CD86表达降低,PD-L1表达增高。CAP并发脓毒症患者入院早期NLR高于未并发脓毒症者,且NLR与Treg正相关,与mDC、pDC负相关。上述结论提示CAP并发脓毒症时患者体内Treg及DC数量及功能紊乱,介导了 CAP并发脓毒症时机体免疫功能异常,NLR升高与CAP病情严重程度相关,因此上述指标可能作为早期预测肺炎病情严重性的指标。