小鼠皮肤移植模型中HLA-G小鼠同源类似物H2-Bl的表达研究

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目的:建立小鼠皮肤移植模型,研究人类白细胞抗原-G(human leucocyte antigen-G,HLA-G)小鼠同源类似物H2-Bl在皮肤移植术后mRNA的表达变化规律及免疫抑制剂对其表达规律的影响,从而为HLA-G能否作为人类器官移植预后监测指标提供实验依据。  方法:将87只C57小鼠随机分为:空白对照组、自身移植对照组和异体移植组,在异体移植组中又分为异体移植未用药组、异体移植持续用药组和异体移植短期用药组。采用背对背的皮肤移植方式构建小鼠皮肤移植模型。在移植手术后的第1、2、3、7、10、15、21天,肉眼观察移植皮片大体生存情况,同时取移植皮片进行病理学活检,以病理结果为排斥标准;留取外周血和脾脏标本用RT-PCR技术检测H2-BlmRNA的表达情况。实验数据采用T检验(student’s t- test)进行多组间的两两比较。  结果:⑴自体移植组小鼠:移植皮肤生长情况良好,HE染色显示未排斥,外周血细胞H2-Bl mRNA的表达与空白对照组无显著差异。⑵未用药组:肉眼观察术后第5-7天移植皮肤开始排斥,9-12天完全排斥,HE染色显示移植皮片术后第7天出现中度排斥表现,第10天出现重度排斥或严重排斥表现;外周血细胞H2-Bl mRNA术后表达升高,第7天达到峰值后逐渐下降;脾脏细胞H2-Bl mRNA的表达术后逐步升高,与自体移植组差异显著,第3天逐步下降,至第21天时与自体移植组无差异。⑶持续给药组:肉眼观察术后第17-18天移植皮片开始排斥,但在整个观察期未发生完全排斥,HE染色显示术后小部分移植皮片第10天出现中度排斥表现,第15天出现重度排斥,但只有极个别出现严重排斥表现;外周血细胞H2-Bl mRNA的表达术后变化不显著,第10天后升高,明显高于自体移植组;脾脏细胞H2-Bl mRNA表达明显升高,与自体移植组差异显著,到第3天开始下降。⑷短期用药组:术后第7天停止给药,肉眼观察术后第12-14天移植皮肤发生排斥,在第16-17天皮肤被完全排斥,HE染色显示大部分移植皮片第10天出现中度排斥表现,第15天出现重度排斥或严重排斥;外周血细胞H2-Bl mRNA的表达情况与持续用药组结果相似,但术后第21天观察点的表达低于持续用药组;脾脏细胞H2-Bl mRNA的表达情况与持续用药组结果相似,但随着表达的下降,在第21天时已与自体移植组无显著差异。⑸异体移植未用药组与用药组外周血细胞和脾脏细胞H2-BlmRNA的表达差异显著。  结论:①模型鼠外周血H2-BlmRNA的表达变化与移植皮肤的排斥反应发生在时相上同步,H2-Bl在体内的表达与移植抗原的刺激及持续存在有关:移植抗原可诱导H2-Bl mRNA的表达,抗原的持续存在可使H2-Bl mRNA的表达持续升高,而随着抗原的清除H2-BlmRNA的表达迅速降低。小鼠外周血H2-Bl mRNA有可能作为小鼠皮肤移植后排斥反应的监测指标。其为HLA-G作为人类器官移植预后监测指标提供了实验依据。②使用CsA可以延长移植皮肤的存活,并可维持H2-BlmRNA在较高水平上表达。
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