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梨形虫病(Piroplasmosis),旧称焦虫病,是一类由梨形虫纲巴贝斯科或泰勒科原虫引起的寄生于人类和多种动物红细胞内的蜱传性血液原虫疾病,包括巴贝斯虫病(Babesiosis)和泰勒虫病(Theileriosis)。临床表现主要包括贫血、高热、黄疸、消瘦、精神沉郁等症状。梨形虫病分布于世界各地。梨形虫宿主范围较广泛,可感染人类和野生及驯养的哺乳动物,给养殖业造成巨大损失的同时,也威胁着人类健康,具有重要公共卫生学意义。本研究对我国郑州地区犬源梨形虫感染和分布情况进行了调查,并对其遗传进化关系进行了分析,可望对犬梨形虫病的发生、流行与防控提供一定的科学参考。1.2013年4月至2017年7月期间,从河南省郑州市10个不同的地点,采用前肢静脉采血法共收集393份犬新鲜抗凝血样品。对采得的样本进行血液全基因组DNA提取,所获DNA样本分别进行基于18S rRNA基因的常规PCR和巢氏PCR扩增,并对阳性扩增产物进行测序鉴定。结果显示,犬梨形虫的总体感染率为5.34%(21/393)。阳性样品中共检测到三种梨形虫病原,分别为吉氏巴贝斯虫(3.82%,15/393)、吕氏泰勒虫(1.01%,4/393)和环形泰勒虫(0.51%,2/393)。不同采样点犬梨形虫的感染率各异,从0%至100%不等;大型犬吉氏巴贝斯虫的感染率(7.55%,8/106)显著高于中型犬(1.87%,2/107)和小型犬(2.48%,5/180),其中,罗威纳犬和德国牧羊犬的感染率分别达到100%(1/1)和45.45%(5/11)。然而,不同饲养模式下,家庭饲养犬(5.64%,19/337)与流浪犬(3.57%,2/56)的梨形虫感染率无显著差异;雄性犬(5.43%,10/184)与雌性犬(7.19%,11/153)的梨形虫感染率差异也不显著。2.对获得的21份犬梨形虫的18S rRNA基因序列,分别应用SeqMan和ClustalX 2.11软件进行比对和校准。对校准后的犬源巴贝斯虫和泰勒虫序列,同时使用MEGA6.06软件基于Neighbor-Joining法对其进行分子种系发育进化分析,进而构建遗传发育进化树。犬源巴贝斯虫的进化分析结果表明,本研究中鉴定的吉氏巴贝斯虫均聚集于之前报道的吉氏巴贝斯虫分枝中。本研究共鉴定出两种吉氏巴贝斯虫基因型,一种为以DXY7和YD11为代表,与日本的亚洲型(LC012808)和美国的北卡罗来纳型(AF271081)同源性达99%;另一种为以W4和YN21为代表,与我国武汉(KP666166)和美国(EU084677)的吉氏巴贝斯虫同源性达99%。犬源泰勒虫的进化分析结果表明,环形泰勒虫有两种基因型,分别为YN16和YN2。其中,YN16与印度(KT367868)发现的环形泰勒虫同源性为99%,YN2与我国(EU083800)牛源环形泰勒虫的同源性为99%。吕氏泰勒虫有两种基因型,分别为基因型LL16、DXY28、WT10,以及DF84。其中,LL16和DXY28与WT10形成单独的分枝;而DF84与河南嵩县(JX469518)的吕氏泰勒虫同源性为99%。综上所述,本研究报道了我国郑州地区犬源梨形虫的感染和分布情况,并进行了分子种系发育进化分析。研究中发现的犬源巴贝斯虫病原全部为吉氏巴贝斯虫,该病原可能为郑州地区犬源巴贝斯虫的优势种;本研究首次报道了我国环形泰勒虫和吕氏泰勒虫的犬源宿主。研究结果为我国犬源梨形虫病流行病学及遗传进化分析提供一定的数据支持。