论文部分内容阅读
目的:多溴二苯醚(Polybrominated Diphenyl Ethers,PBDEs)作为一系列商业产品中的阻燃添加剂被广泛使用,例如纺织品、涂料、家具、手机等。PBDEs产量大,并且可以从产品中被释放到环境中,成为无处不在的环境内分泌干扰物(Environmental Endocrine Disruptors,EDCs)。由于它具有持久性、亲脂性、生物蓄积性和生物放大作用,因此影响深远。PBDEs的危害已引起了相关国际组织的高度重视,到目前为止,在多个国家和地区它的生产和使用已经被限制或禁止,而我国仍大量生产并使用十溴二苯醚(Decabromodiphenyl Ether,DBDE)。目前国内外有关PBDEs宫内暴露与甲状腺功能相关性的流行病学研究结果不一致,而这一争议并没有相关的动物实验研究可以明确解释。并且国内外对于PBDEs宫内暴露对后代甲状腺功能影响方面的研究较少,PBDEs宫内暴露对连续多代仔鼠甲状腺功能影响方面的研究报道更少,其机制亦不明确。本研究拟通过建立SD大鼠PBDEs宫内暴露模型,观察其是否会对后代仔鼠的甲状腺功能及其形态以及血糖产生影响,并探索其潜在的可能机制。研究方法:30只4周龄SPF级雌性SD大鼠,在SPF级环境中适应性喂养1周后,随机分为3组(大、小剂量组和对照组)并标记(HD、LD和Con组),从5周龄开始,给予不同剂量的DBDE口服暴露,第一代出生当天即停止暴露,其中HD组每天1000mg/kg bw、LD组每天100mg/kg bw、Con组0mg/kg bw。将DBDE粉末与2克SPF级粉末状大鼠生长繁殖饲料及玉米油混合后于代谢笼中喂养大鼠,每周称量一次体重以调整暴露剂量。连续暴露3周后,于8周龄时将雌鼠与同周龄的SPF级SD雄鼠(雌/雄的比例为2:1)合笼,次日清晨行阴道涂片于光学显微镜下观察有无精子,阳性者即为怀孕当天(GD0),然后继续暴露至第一代出生当天(PND0)。后代鼠均不直接暴露,都于8周龄时与雄鼠合笼以繁殖下一代。后代鼠(n=10)于PND40时被麻醉处死,称重并取血、甲状腺等。测定F1-F2代PND40仔鼠空腹血糖(试纸法),酶联免疫吸附试验(ELISA)测血清胰岛素、游离甲状腺素(FT4)、总甲状腺素(TT4)、促甲状腺激素(TSH)、抗甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)、转甲状腺素蛋白(TTR)。HE染色观察PND40仔鼠甲状腺滤泡大小和肝脏形态变化。PND40仔鼠甲状腺组织MASSON三色染色观察其胶原纤维分布情况。CD45、CD19、CD8、CD4免疫荧光染色观察甲状腺淋巴细胞浸润情况。结果:1.F1和F2代PND40仔鼠体重:F1和F2代仔鼠体重较Con组均无统计学差异(P﹥0.05)。2.F1-F2代PND40仔鼠甲状腺和肝脏HE染色:与Con组相比,HD组中F1代仔鼠甲状腺滤泡直径明显减小,且P﹤0.05,F2代差异无统计学意义;LD组两代均无统计学差异。F1代HD组仔鼠的肝小叶中心空泡样变,肝小叶组织内部稀疏。3.F1-F2代PND40仔鼠甲状腺MASSON三色染色:HD组中F1代仔鼠甲状腺组织胶原纤维面积较Con组明显增大(P﹤0.05),F2代无明显变化;LD组两代较Con组无明显变化。4.F1代PND40仔鼠甲状腺CD45、CD19、CD8、CD4免疫荧光染色:HD组甲状腺组织间质中有T/B淋巴细胞浸润。5.F1和F2代PND40仔鼠血清Tg Ab水平:与Con组相比,F1和F2代DBDE处理组仔鼠血清Tg Ab均无统计学差异(P﹥0.05)。6.F1和F2代PND40仔鼠血清FT4、TT4、TSH、转甲状腺素蛋白(TTR)水平:与Con组相比,F1代HD组仔鼠血清FT4浓度显著降低(P﹤0.01),TT4水平明显降低(P﹤0.05),TSH水平无统计学差异(P﹥0.05),TTR水平显著降低(P﹤0.01);F1代LD组和F2代仔鼠血清FT4、TT4、TSH、TTR均无明显差异(P﹥0.05)。7.F1和F2代PND40仔鼠空腹血糖和血清胰岛素水平:F1代HD组仔鼠空腹血糖和血清胰岛素水平较Con组均显著升高(P﹤0.01),而LD组无统计学差异;而F2仔鼠两组空腹血糖和血清胰岛素水平均无统计学差异(P﹥0.05)。结论:母鼠宫内暴露PBDEs后对F1代PND40仔鼠甲状腺组织形态和功能产生一定的影响,出现低T4血症;并使F1代仔鼠出现胰岛素抵抗。然而,对甲状腺形态学及其功能和糖代谢的影响并未在F2代仔鼠中发现。