鸡I亚群禽腺病毒(Fowl AdenovirusI,FAdV-I)属于腺病毒科、禽腺病毒属,以其病毒DNA的限制片段长度多态性(RFLP)图谱以及血清交叉中和试验为基础可分为(A-E)5 个种,(FAdV-1～7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9～11)12 个血清型。包涵体肝炎(Inclusion Body Hepatitis)和心包积液综合征(Hydropericardium Syndrome)是世界范围包括中国在内鸡I亚群禽腺病毒引起的最主要的疾病。而I亚群禽腺病毒的12种血清型都能引起鸡的包涵体肝炎,其中只有血清4型禽腺病毒能引起鸡的心包积液综合征。近五年来,我国较多省份的禽类养殖场均有暴发鸡心包积液及鸡包涵体肝炎疾病,且国内暂无商品化的疫苗来防控FAdV-I的感染。而FAdV-I血清型较多,不同血清型之间没有或只有微弱的交叉保护力,为临床防控带来了很大的困难。因此,本研究挑选了四株优势血清型毒株(FAdV-2、FAdV-4、FAdV-5、FAdV-8b),分别属于D、C、B、E四个种,制备并优化鸡I亚群禽腺病毒多价油乳剂灭活疫苗,对FAdV-I的防治与养鸡业的健康发展具有重要的应用价值。1.血清2、4、5、8b型禽腺病毒增殖方法的筛选将试验室保存的FAdV-2、FAdV-5、FAdV-8b流行血清型毒株及试验室采集后分离鉴定保存的流行株FAdV-4进行复壮、增殖,通过比较鸡胚、293a细胞、鸡胚原代肝细胞及LMH细胞,这几种不同方式来增殖病毒的效果,最后选择操作方便、稳定获得、能对禽腺病毒产生明显病变、能有效提高病毒滴度的LMH细胞来增殖病毒。对稳定增殖后的病毒进行鸡胚半数感染量及组织细胞半数感染量的测定,来确定疫苗种子批病毒的毒力水平。得到种子批禽腺病毒FAdV-2、FAdV-4、FAdV-5、FAdV-8b的EID50分别为 10-6.7/0.2mL,10-7.38/0.2 mL,10-7.83/0.2mL,10-7.62/0.2 mL;TCID50 分别为 10-6.77/0.1 mL,10-7.4/0.1 mL,10-7.63/0.1 mL,10-7.6/0.1 mL。2.禽腺病毒四价灭活苗的制备与油水比的优化本试验继续采用传统的甲醛灭活方式来灭活抗原,将血清2、4、5、8b型禽腺病毒液按1:2:1:1的体积比混合,按甲醛终浓度为0.15%,37℃灭活24h制成抗原液,设置3种油水比制备三批油乳剂灭活苗进行对比试验,分别对它们的粘度、稳定性、无菌性、安全性等进行质量检验,直观的检测结果显示当疫苗的油水比为2:1和3:1时性状都比较稳定,4:1组离心后有少量液体析出,稳定性稍差。保存期2:1组较3:1组与4:1组更久。三组疫苗无菌检验及安全性检验均合格。3.禽腺病毒四价灭活苗免疫效力的研究对7日龄SPF鸡分别免疫接种本试验制备的三种油水比油乳剂灭活苗,得到2:1组、3:1组、4:1组的最小免疫剂量为0.3 mL。免疫接种两周后每周通过琼脂凝胶扩散试验及中和试验对免疫组抗体水平进行监测,而中和试验的检测结果更为清晰、灵敏。测得接种疫苗2周后抗体水平开始上升,第4周时抗体水平达到峰值,之后呈下降趋势。由于油水比2:1组的稳定性最高,免疫效果最好,因此选择油水比2:1组为最佳油水比进行攻毒保护试验。疫苗攻毒保护试验显示本试验制备的四价油乳剂灭活疫苗对四种血清型病毒的保护率都为100%,而攻毒组出现死亡及临床病症,可见此疫苗能有效抵御鸡禽腺病毒的感染。