【摘 要】
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大豆营养丰富,富含蛋白质和氨基酸,被誉为“豆中之王”,因此作为植物蛋白质来源被广泛应用于饲料中,而大豆中的抗原蛋白会引起断奶仔猪过敏,造成仔猪腹泻,进而影响仔猪的生长性能,给养猪业造成损失。大豆抗原蛋白β-conglycinin是免疫原性最强的抗原蛋白。本试验用不同水平的β-conglycinin替换日粮中的非大豆蛋白源,探明β-conglycinin的大分子抗原肽段在仔猪肠道内吸收转运的机制,为
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31872366）；
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大豆营养丰富,富含蛋白质和氨基酸,被誉为“豆中之王”,因此作为植物蛋白质来源被广泛应用于饲料中,而大豆中的抗原蛋白会引起断奶仔猪过敏,造成仔猪腹泻,进而影响仔猪的生长性能,给养猪业造成损失。大豆抗原蛋白β-conglycinin是免疫原性最强的抗原蛋白。本试验用不同水平的β-conglycinin替换日粮中的非大豆蛋白源,探明β-conglycinin的大分子抗原肽段在仔猪肠道内吸收转运的机制,为探寻预防和治疗大豆抗原蛋白引起的腹泻,改善仔猪健康水平,提高饲料利用率提供理论依据。（1）β-conglycinin的分离提纯和兔抗β-conglycinin多克隆抗体的制备本试验根据蛋白质的等电点性质对β-conglycinin进行分离,再使用盐析法对β-conglycinin进行提纯。用提纯后的β-conglycinin免疫新西兰白兔,得到的抗血清效价为1:3280500。（2）β-conglycinin对断奶仔猪生长性能和免疫指标的影响将18头10日龄仔猪随机分为三组,饲养试验期为14天。对照组饲喂无大豆蛋白来源的基础日粮,低组和高组分别饲喂由2%和4%β-conglycinin替代基础日粮中酪蛋白而配制的试验日粮。试验结束后对仔猪进行屠宰和采样。结果表示β-conglycinin添加组的仔猪日采食量显著降低（P＜0.01）,日增重显著下降（P＜0.05）,仔猪腹泻率随着β-conglycinin蛋白添加剂量增多而上升;随着日粮中β-conglycinin含量的增加,血清中的总Ig E、特异性Ig E和脾细胞培养液中的IL-4水平显著升高（P＜0.05）,IFN-γ水平显著降低（P＜0.05）;4%β-conglycinin添加组的空肠绒毛高度显著降低（P＜0.01）,隐窝深度显著升高（P＜0.05）,绒隐比显著降低（P＜0.05）。（3）β-conglycinin在仔猪小肠粘膜吸收转运机制本试验使用Western blot技术和多肽组测序技术对β-conglycinin在仔猪小肠中消化吸收的抗原种类进行鉴定,使用免疫荧光标记技术和免疫电镜技术在空肠肠粘膜中对β-conglycinin抗原分子进行定位,使用蛋白质组学和转录组对高组（4%添加组）和对照组进行差异蛋白和差异基因进行筛选。结果表明β-conglycinin的大分子抗原肽段通过形成Ig E-抗原复合物被CD23以跨细胞的方式吸收转运进入小肠粘膜中;β-conglycinin的α、α’和β亚基及其52～70k Da抗原肽段能够被吸收进入小肠粘膜组织中,α、α’和β亚基的多种小分子抗原肽段（＜10k Da）被吸收进入血液循环;添加4%β-conglycinin组（高组）和对照组空肠中的差异表达蛋白质有292个,主要表现在免疫应答和跨细胞转运等功能;添加4%β-conglycinin组（高组）和对照组空肠中的差异表达基因的功能主要体现在一些生物学过程中。
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