【摘 要】
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目的:研究人β趋化因子受体5(huCCR5)N-端膜外第一襻的特异性抗体F(ab)的制备及鉴定方法.方法:我们利用计算机分析趋化因子超基因家族,定位超基因家族中同源顺序最低的结构域
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目的:研究人β趋化因子受体5(huCCR5)N-端膜外第一襻的特异性抗体F(ab)<,2>的制备及鉴定方法.方法:我们利用计算机分析趋化因子超基因家族,定位超基因家族中同源顺序最低的结构域N-端膜外第一襻结构域,PCR扩增出该结构域中114个核苷酸序列.构建融合表达产物pGEX-IN/CCR5,经测序鉴定正确后,在E.coli中表达,经纯化后免疫纯种新西兰白兔.经A蛋白-Sepharose CL-48亲和层析纯化后,用胃蛋白酶消化IgG,经S-200凝胶过滤柱分离制备F(ab)<,2>,并对所制备F(ab)<,2>的特异性进行鉴定.结论:我们采用GST融合表达载体(pGEX-IN)在大肠杆菌DE<,3>中有效表达CCR5N-端膜外第一襻基因片段,并制备出抗huCCR5 N-端的特异性抗体F(ab)<,2>.该方法为一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab)<,2>的制备方法,对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料,同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法.
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