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卵巢的深低温冻存后移植已逐渐成为青年和未成年女性癌症患者保存生育力的一个策略,但冻存及无血管吻合移植后卵泡的大量丢失使移植卵巢功能寿命缩短。因此,寻找有效的途径解决冻存及移植卵泡丢失的问题成为女性生育力体外保存的研究热点。本研究组前期工作显示HMG体外短暂干预可使小鼠移植卵巢血流灌注时间提前、FSH干预下绵羊冻存移植卵巢卵泡存活率提高,这些仅仅是从卵泡存活的角度观察到的Gn作用,尚缺少对相关机制及生育力保存观察的实验依据。故本研究将分别通过FSH、LH对小鼠卵巢进行体外干预,观察其对血管生成和抗凋亡相关因子表达及干预对玻璃化冻存卵巢原位移植后的产子影响,希望能为促性腺激素干预提高卵巢移植后生殖力提供科学依据。第一部分:重组人FSH、LH对培养小鼠卵巢VEGF和Survivin表达的影响目的:探索重组人FSH、LH对小鼠卵巢体外培养后血管内皮生长因子(VEGF)和存活素(Survivin)表达的影响。方法:实验分为新鲜对照组、非干预培养组和Gn干预培养组。Gn干预组又分为FSH和LH两组,各组干预浓度均分为0.15IU/ml、0.3IU/ml、0.6IU/ml三个浓度组。将新鲜取材8周龄小鼠(132只)的每只4个半卵巢置于非干预对照组和三个干预浓度液中,于体外培养3h、6h、12h、24h后通过免疫组织化法、RT-PCR、Elisa观察半卵巢VEGF、Survivin的表达并进行分析。结果:免疫组化和Elisa显示FSH、LH干预组培养6h、12hVEGF表达量均高于非干预培养组,免疫组化、Elisa和RT-PCR均显示FSH、LH干预组培养12小时Survivin表达量均高于非干预培养组。培养24小时0.3IU/ml LH在维持VEGF表达明显高于其他干预组,P<0.05。FSH、LH干预后,VEGF和Survivin的变化,在0.01水平(双侧)上显著相关,Pearson相关性为0.792,P<0.001。结论FSH、LH体外干预可上调小鼠VEGF、Survivin表达,且VEGF和Survivin的上调呈正相关,培养液中0.3IU/mL LH在维持高表达VEGF、Survivin上明显优于其它实验组。第二部分LH干预对玻璃化冻存小鼠卵巢异体原位移植后产子率的影响目的:研究LH干预对玻璃化冻存小鼠卵巢异体原位移植后的存活及功能恢复情况。方法:以C57BL/6J小鼠(黑毛色)为卵巢供体,以C57BL/6J-Tyr c-2J-J的白毛鼠(系毛色基因突变鼠)为受体,随机分为正常对照组、新鲜移植组、非干预玻璃化移植组和LH干预玻璃化移植组。每组白毛鼠和黑毛鼠各6只,通过本交实验观察产仔情况。正常对照组为雄性白毛鼠直接与黑毛雌性性小鼠合笼;新鲜移植组为将黑毛小鼠卵巢进行囊内双侧完整剥离后,分别移植于去卵巢白毛小鼠两侧的卵巢囊内;玻璃化移植组分为非LH干预组与0.3IU/ml的LH干预组,用同样的方法剥离黑毛小鼠的卵巢,玻璃化冻存3天后移植。移植后通过观察动情周期和产下黑毛小鼠的情况对生育率的保护效率进行观察。结果在移植后各实验组动情周期均恢复,新鲜移植组为6.5±1.04天,玻璃化移植组时间为9.33±1.21天,LH玻璃化移植组7.16±1.17天,玻璃化移植组动情周期恢复时间较新鲜移植组和LH玻璃化移植组延长,有统计学意义,P<0.05;合笼后各实验组小鼠均正常妊娠,正常对照组5.83±1.94只/窝,新鲜移植组4.67±1.37只/窝,玻璃化移植组2.83±0.98只/窝,与新鲜组相比有显著性差异,P<0.05。LH玻璃化移植组4.16±1.72只/窝,与新鲜移植组相同,组间无有显著性差异。结论0.3IU/ml LH干预玻璃化液有助于同基因小鼠卵巢异体原位移植后动情周期的恢复和产仔率。