Tth DNA聚合酶与广泛使用的Taq DNA聚合酶有88%氨基酸序列同源性,具有更适合粗样品直接扩增,对受损DNA模板有高耐受性,以及利用单酶可实现一步法RT-PCR等优势。然而,在以往研究中也发现Tth DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶更容易产生非特异性产物,并且由于针对Tth DNA聚合酶的改造研究以及相应的配套产品开发远远落后于Taq DNA聚合酶,使得Tth DNA聚合酶的应用十分受限。热启动体系建立已经成为聚合酶在诊断领域使用的一个必要条件,也是解决聚合酶非特异性扩增的一个重要技术。针对该问题,本研究尝试筛选Tth DNA聚合酶特异性的抗体,来建立Tth DNA聚合酶热启动扩增体系,以提高扩增的特异性和灵敏度。我们同时筛选了Tth蛋白的小鼠单克隆抗体和羊驼纳米抗体。通过建立酶活测试方法,检测抗体在50℃下对Tth 5’-3’聚合酶活性和5’-3’外切酶活性的封闭效率。通过功能性实验,验证这些抗体是否适合组建热启动PCR体系。最终我们筛选获得对Tth DNA聚合酶的5’-3’聚合酶活性有着高封闭率的三株单克隆抗体,而在高温处理后,酶活得到了恢复,该抗体符合热启动体系设置的要求。有趣的是,其中两株抗体对Tth DNA聚合酶的5’-3’外切酶活性也展现了较高的封闭效率。推测是抗体与Tth DNA聚合酶结合后,对两个酶活区域的空间结构都产生了比较大的影响,但还需要进一步的实验来证明。本研究成果有助于增加Tth DNA聚合酶的使用场景,具有较大的应用价值。同时,本研究中也建立了包括5’-3’聚合酶活性和5’-3’外切酶活性等一系列酶活测试方法,为Tth DNA聚合酶其它相关研究提供了方法学参考。该论文有图45幅,表26个,参考文献89篇。