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目的:子痫前期(Pre-eclampsia,PE)是妇产科严重的妊娠高血压疾病,可导致孕产妇和围产儿死亡,目前针对PE尚无有效的干预手段,迅速娩出胎盘是唯一的治疗方法。已有文章报道滋养细胞侵袭能力减弱、血管重铸障碍可导致胎盘缺血缺氧。研究发现神经上皮转化基因-1亚型(neuroepithelial cell-transforming gene 1 protein isoform 2,NET1A)与肿瘤细胞运动能力密切相关,在多种癌组织中呈高表达。多种研究表明,NET1A可以通过调节Rho依赖的肌球蛋白磷酸酶靶标亚基(Myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)的磷酸化以及肌球蛋白轻链(Myosin Light Chain 2,MLC2)活化水平来调控细胞的迁移和侵袭。然而NET1A在胎盘中的作用并不清楚,本研究旨在确定NET1A在PE胎盘中的表达和定位,探究NET1A在胎盘中的作用,对滋养细胞生物学行为的影响,及其可能参与PE发生发展的机制。方法:在重庆医科大学附属第一医院产科收集实验标本,即住院行选择性剖宫产术的孕妇的胎盘组织,包括正常妊娠组(20例)和子痫前期组(20例)。2.利用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)和免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)确定AMPK在胎盘中的表达和定位;Percoll梯度密度离心法提取正常组胎盘和PE组胎盘原代滋养细胞并检测AMPK的表达。3.采用免疫共沉淀方法(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)检测AMPK和NET1A的相互作用关系,继而WB(Western Blot,WB)检测了正常和PE胎盘中NET1A蛋白水平、mRNA水平及其下游肌球蛋白磷酸酶靶标亚基(Myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)的磷酸化以及肌球蛋白轻链(Myosin Light Chain 2,MLC2)的活化水平。4.用AMPK特异性激动剂AICAR干预人绒毛外滋养细胞(Human transformed primary extravillous trophoblast cell line,HTR8/Svneo),然后利用WB检测NET1A的蛋白定位及表达差异,并且检验NET1A下游MYPT1和MLC2的蛋白表达水平。5.利用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)干扰HTR8/Svneo中NET1A的表达,并且利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRTPCR)和WB检验NET1A siRNA特异性序列的干扰效果。将HTR8/Svneo细胞分为空白对照组(Con)、阴性对照组(siCon)和NET1A干扰组(siNET1A-1),并利用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,用CCK8(cell counting kit 8)检测细胞的增殖,WB检测MYPT1和MLC2的蛋白表达水平,Transwell和划痕实验检测各组细胞的迁移侵袭。结果:1.AMPK在胎盘中表达明显,且主要表达在滋养细胞,PE胎盘中p-AMPK表达上调,提取胎盘原代滋养细胞证实正常胎盘和PE胎盘AMPK磷酸化水平的差异主要来源于滋养细胞;2.证实了滋养细胞中AMPK与NET1A之间存在相互作用,PE胎盘中NET1A在胞浆中表达下降,其下游信号分子MYPT1和MLC2的磷酸化也下降;3.AICAR激活HTR8/SVneo细胞AMPK后,NET1A、p-MYPT1、p-MLC2表达与PE胎盘中表达一致;4.下调NET1A的表达,p-MYPT1、p-MLC2表达降低且滋养细胞增值减少凋亡增加,细胞的迁移侵袭能力降低。结论:胎盘缺血缺氧会引起AMPK的磷酸化水平增加,继而使NET1A核质转运失衡,NET1A下游MYPT1、MLC2磷酸化减少,滋养细胞运动能力下降,滋养细胞的运动能力下降,细胞的凋亡增加,增殖减少,从而导致子痫前期的发生。