基于M2型丙酮酸激酶(PKM2)为靶点的哈萨克族食管鳞癌分子分型的研究

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目的:探索M2型丙酮酸激酶(PKM2)作为哈萨克族食管鳞癌分子分型的可行性。方法:在细胞水平,将人工合成针对PKM2基因的siRNA片段通过Lipofectamine2000转染食管鳞癌细胞株Eca109。实验分为3组,分别是空白对照组、阴性对照组、实验组。应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blot法检测各组细胞中的PKM2在mRNA和蛋白水平的表达量,并用MTT法检测各组细胞增殖活力,流式细胞仪检测各组细胞的周期和凋亡的改变,划痕实验和Transwell体外侵袭实验检测迁移和侵袭的变化。在组织水平,收集了新疆医科大学第一附属医院2000年至2008年间,手术切除并经过病理检查证实哈萨克族食管鳞癌组织及其癌旁正常组织,应用免疫组织化学方法检测哈萨克族食管鳞癌组织及其癌旁正常组织中PKM2的表达,并分析与临床病理参数之间的关系。结果:PKM2siRNA成功转染Eca109细胞后,qRT-PCR检测3组结果显示,实验组中PKM2mRNA水平表达量显著低于空白对照组和阴性对照组,差异具有统计学意义(P=0.012,P=0.018)。Western blot分析显示实验组PKM2蛋白表达量降低,与空白对照组和阴性组相比差异有统计学意义(P=0.018,P=0.046)。MTT实验结果显示,实验组细胞的增殖能力明显减弱,与其他两组比较差异具有统计学意义(P=0.01,P=0.041)。PKM2基因表达沉默后,细胞凋亡率为66.3%较空白对照组和阴性对照组明显增加,差异有统计学差异(P=0.000,P=0.000)。实验组细胞周期被阻滞在G0/G1期。Transwell体外侵袭实验显示实验组穿过聚碳酸酯膜的细胞个数为(56.5±8.7)显著低于空白对照组(140.3±5.8,P=0.000)与阴性对照组(109.3±20.1,P=0.036)差别有统计学意义。划痕实验结果显示,72小时后实验组细胞的迁移力明显降低与其他两组相比,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.001)。在哈萨克族食管鳞癌组织中PKM2蛋白的阳性表达明显高于相对应的癌旁组织,两者比较差异有统计学意义(P=0.043)且与患者食管鳞癌组织的浸润深度(P=0.029)、分化程度(P=0.01)、及淋巴结转移(P=0.041)相关,而与性别、年龄、大体类型(P>0.05),关系不明显。结论:PKM2可以促进食管鳞癌细胞的增殖、侵袭和转移。
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