论文部分内容阅读
目的:探索丝氨酸羟甲基转移酶2(serine hydroxymethyl transferase 2,SHMT2)在小鼠肝再生过程中的表达规律,以及其在小鼠肝再生过程中发挥的作用。方法:1.SPF级C57BL/6小鼠90只分为肝切除组(2/3PH)50只、假手术组(Sham组)10只、尾静脉注射携带SHMT2 sh RNA腺病毒组(sh SHMT2组)10只、尾静脉注射阴性对照腺病毒组(Control组)10只、尾静脉注射生理盐水空白对照组(NS组)10只。小鼠肝切除之后,记录切除肝脏的重量,并在对应的时间点1、3、5、7、9 d收集肝脏组织及血清。同时收集Sham组的肝脏组织及血清,用qPCR、Western blot(WB)和免疫组化检测SHMT2及其下游分子甘氨酸脱羧酶(glycine decarboxylase,GLDC)的变化规律,自动生化分析仪检测血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)的水平。2.取shSHMT2组、Control组及NS组的小鼠肝脏组织,冰冻切片观察绿色荧光强度,Western blot检测SHMT2表达量验证腺病毒的干扰效率,用免疫组化法检测三组肝脏组织中增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)的表达,比较三者肝再肝脏重量、肝再生度、肝指数及小鼠血清中的ALT、AST水平。结果:SHMT2及其下游分子GLDC,均在2/3肝切除术后开始升高,并分别在小鼠肝再生的后第5天,第7天达到峰值,qPCR结果揭示了与WB相似的趋势,SHMT2 m RNA表达量逐渐上升在第5天达到最高为第1天的1.63倍(P<0.05)。在干扰SHMT2之后,NS组与sh SHMT2组比较,再生肝脏的重量由(0.79±0.13)g降低至(0.63±0.11)g(P<0.05),再生度由(36.37±2.21)%降低至(31.33±1.92)%,肝指数由(3.76±0.44)%降低至(3.13±0.29)%,并且肝功能指标ALT由(70.00±9.52)U/L升高至(154.15±16.49)U/L,AST由(140.09±32.85)U/L升高至(403.41±68.63)U/L(P<0.05),PCNA阳性率从(53.6±2.3)%降低至(39.0±3.2)%(P<0.05)。结论:1.SHMT2在肝脏再生过程中表达水平有明显变化,在PH之后开始上升,且在第5天达到峰值。2.SHMT2表达被干扰后,小鼠肝再生度及肝功能均有所降低,肝脏增殖减弱,说明SHMT2对肝脏再生有促进作用。