论文部分内容阅读
血液系统恶性肿瘤是当前威胁人类健康的重要疾病，具有很高的发病率和死亡率。白血病／淋巴瘤等肿瘤经联合化疗，虽可以获得完全缓解，但难彻底消灭肿瘤微小残留病(MRD)。因此，通过肿瘤特异性免疫治疗最大限度地杀灭残留肿瘤细胞是防止复发，延长缓解期和无病生存期的关键。本研究拟以腺病毒载体将Survivin与GM-CSF基因导入树突状细胞，诱导特异性CTLs，观察对血液肿瘤细胞的杀伤效应，为肿瘤的基因免疫治疗奠定基础。 目的 构建含有人survivin和人GM-CSF基因的重组腺病毒载体，对人外周血单核细胞进行诱导培养，获得树突状细胞(DC)；以腺病毒载体介导survivin基因与GM-CSF基因修饰树突状细胞，使之作为抗原呈递细胞，在呈递肿瘤抗原的同时又持续分泌高滴度的GM-CSF，从而诱导更强的特异性CTLs，对血液系统恶性肿瘤细胞发挥强大的杀伤效应，为以DC为基础的肿瘤免疫治疗提供实验依据。 方法 1、合成一对分别含有Kpn Ⅰ和HindⅢ酶切位点的survivin和GM-CSF基因的上下游引物，以质粒pcDNA3.0-survivin和质粒pBlu-hGM-CSF为模板，通过PCR法获得survivin和GM-CSF基因全长序列。片段回收后经酶切，定向插入腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV，分别获得重组质粒pshuttle-CMV-survivin和pshuttle-CMV-GM-CSF，并通过酶切、PCR及插入片段测序等方法鉴定。 2、将正确的重组体pshuttle-CMV-survivinh和pshuttle-CMV-GM-CSF转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ5183菌。同源重组后用选择性培养基筛