鱼精蛋白作为医药和食品领域具有开发和应用潜力的天然抑菌剂,近年来日益受到人们的关注。本文通过对金黄色葡萄球菌生物膜的构建,以鱼精蛋白作为抑菌剂,研究它对金黄色葡萄球菌生物膜的干预作用,并探讨其对PIA合成和eDNA分泌的影响,为食品及医药领域中预防金黄色葡萄球菌存在的安全隐患提供新的途径,并为进一步研究鱼精蛋白的作用机制奠定基础。本论文得到了以下结果：1.通过刚果红平板实验证实了受试的金黄色葡萄球菌可以产生生物膜,然后在24孔细胞培养板中,以普通盖玻片为载体,孵育金黄色葡萄球菌在玻片上形成生物膜。对生物膜菌落计数发现,随着培养天数的增加,膜内活菌数不断增多,到第3天时达到最大值,而后活菌数明显降低,第4至6天菌落数没有显著差异,继续培养膜内活菌数又开始下降。通过结晶紫染色观察黏附菌,银染法观察胞外多糖蛋白复合物,并结合菌落计数,可以发现细菌生物膜中的活菌数与被膜量变化并不一致。2.从初始加入鱼精蛋白对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响,及其对成熟生物膜的影响这两个方面进行研究,探讨鱼精蛋白对生物膜形态及膜内活菌数的影响。结果如下：鱼精蛋白对受试金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度MIC为125μg/mL,最低杀菌浓度MBC为1000μg/mL。培养初始鱼精蛋白浓度为4MIC时,各天膜内活菌数均急剧下降,玻片上也基本不见成团的生物膜。当培养开始前添加鱼精蛋白至MBC浓度,即8MIC (1000μg/mL)时,玻片上活菌数均为零。鱼精蛋白对成熟的生物膜中细菌也有不同程度的杀灭效果,且存在浓度依赖关系,其灭菌及清除生物膜的效果与培养的时间和鱼精蛋白的浓度有关。培养了5天的生物膜对鱼精蛋白更敏感,4MIC就能将膜内细菌全部杀死。相比生物膜形成之后再用鱼精蛋白处理,初始加入鱼精蛋白能更好地减少生物膜形成。3.采用荧光增白剂标记金黄色葡萄球菌生物膜中的胞外多糖,然后用荧光显微镜观察其分布,结果表明：鱼精蛋白能明显抑制金黄色葡萄球菌生物膜的黏附菌产生胞外多糖。培养开始前加入鱼精蛋白的量越大,对黏附菌产生胞外多糖的抑制作用越明显。当生物膜已经形成时再用鱼精蛋白干预,此时需要更大量的鱼精蛋白(>4MIC)才能对黏附菌产胞外多糖发生显著的抑制作用,且与生物膜培养的时间有关。通过蒽酮法定量测定胞外多糖发现,初始及中途加入鱼精蛋白,均能够显著降低金黄色葡萄球菌产水溶性、水不溶性胞外多糖的能力。研究还发现,生物膜形成初期合成更多的水溶性胞外多糖,而继续培养生物膜过程中,则合成更多的水不溶性胞外多糖。4.初始加入>1MIC的鱼精蛋白时,通过Dot blotting检测到生物膜和培养液中的PIA表达量均明显受到抑制,且高浓度鱼精蛋白(4MIC)对其抑制效果更明显。通过eDNA的提取,采用荧光分光光度法探讨鱼精蛋白对eDNA释放的作用,结果发现,初始加入鱼精蛋白,eDNA释放量也明显受到抑制,鱼精蛋白浓度越高,eDNA释放量越小。