鳗弧菌MVM425株毒力质粒pEIB1上转座元件的功能鉴定

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弧菌病是世界水产养殖业的最大危害性疾病之一,而鳗弧菌则是海水鱼类弧菌病的最主要病原菌。从山东黄海海域高密度养殖鲈鱼(Lateolabrax Joponicus)爆发的弧菌病病原体内,分离得到了鳗弧菌V.anguillarum MVM425,其内含毒力质粒pEIB1。前期工作已经完成了该质粒的全序列测定,序列分析结果表明,质粒上含有许多转座子类似结构。但是,之前所有尝试都没有检测到对这类转座子的转座活性。 本课题通过PCR扩增的到ISV-A2转座酶基因,将其克隆在lac启动子下游表达,建立相应的测活系统,检测其转座活性。在该测活系统下,测得ISV-A2的转座频率为为7.2×10-6个Kmr抗性突变株/转化子。并且通过实验证明,转座后ISV-A2会在插入位点产生9bp的正向重复序列。插入位点的序列分析表明,ISV-A2的靶向位点没有明显的序列特异性,只是在个别位点具有较强的序列偏爱性,正向重复序列的侧翼序列具有“嘌呤-嘧啶“的对称结构。这一结果为进一步研究此类转座子的转座机理以及鳗弧菌的毒力机制奠定基础。
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