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荔枝(Litchi chinensis Sonn.)原产于我国,是我国在国际上最具竞争力的热带亚热带水果之一,目前产量已居世界首位,其中以我省为主产区,产量占全国总产量的70%左右,同时也是我省栽培面积最大的特色水果。但是,荔枝有占果重15%的果皮,以2008年报道的129万吨产量计算,果皮可达到19.35万吨,但如此大量的资源并未被利用,而是作为废弃物丢弃了。
荔枝果皮作为一种来源丰富、价格低廉、有待开发利用的植物副产物资源,若能从抗氧化活性,抗癌、抗氧化损伤和抑菌等生物活性、在食品中应用以及活性成分等多方面对其进行系统而全面的研究,这可为充分发挥我省的荔枝资源优势、为寻找开发利用荔枝果皮这一植物副产物的新途径、变废为宝提供一定的理论依据。论文的主要研究内容和结果如下:
首先对荔枝果皮的干燥处理方法和提取溶剂进行筛选。测定不同干燥方法处理和不同溶剂提取的提取物中总酚含量和DPPH自由基清除活性,结果表明,先热烫再加热干燥的处理方法比自然晒干、直接加热干燥和冷冻干燥处理有更好的保存荔枝果皮提取物中酚类抗氧化物质的效果;甲醇较水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯可获得更高含量的酚类抗氧化物质提取物。因此,选用先热烫再加热的干燥方法处理新鲜荔枝果皮,选用甲醇作提取溶剂进行后续研究。
比较了四个品种(淮枝、糯米糍、妃子笑和桂味)荔枝果皮甲醇提取物的总酚含量和抗氧化活性,结果显示,淮枝品种果皮提取物有最高的总酚含量和最强的清除DPPH自由基、抑制脂质过氧化和螯合亚铁离子的活性,活性大小与果皮提取物中的总酚含量有非常好的相关性,表明酚类物质是荔枝果皮提取物抗氧化活性的贡献者。
以总酚提取量和清除DPPH活性为指标,通过单因素试验和正交试验,确定了对总酚提取率和自由基清除活性影响显著的四个因素依次是提取次数、固液比、提取温度和提取时间,并得出荔枝果皮酚类物质最佳提取条件为:回流提取温度80℃、提取时间45min、提取固液比1:15、提取次数三次,在此最优条件下,总酚提取量为53.24 mg/g果皮。
采用体外抗氧化实验,发现荔枝果皮提取物LPE对多种氧化体系具有很强的抗氧化活性,且抗氧化活性高低与浓度大小有关。其清除羟基自由基和超氧阴离子的活性、螯合亚铁离子的活性、抑制脂质过氧化的活性均高于Vc;清除DPPH自由基和过氧化氢的活性强于BHT。LPE含有的酚类物质以黄烷类化合物为主,提示黄烷类化合物是LPE抗氧化活性的贡献者。
采用体外细胞实验,结果表明LPE对人肝癌细胞BEL-7402有明显的抑制作用,且在一定浓度范围内呈现量效关系;它可通过诱导BEL-7402细胞凋亡而抑制细胞增殖。LPE可显著降低H2O2引发人脐静脉内皮细胞ECV-304内ROS积累,显著减少MDA产生,提高SOD活力,从而保护细胞免受H2O2的损伤。
LPE对宋氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡状芽胞杆菌具有很强的抑菌活性,且呈现量效关系,显示具有药理活性。
采用XAD-16大孔树脂纯化LPE,获得的PLPE其总酚含量由LPE的25.4%增加到53.1%,纯度提高了2.05倍;纯化后的PLPE在清除多种自由基和ROS、螯合铁离子、还原能力和抑制脂质过氧化活性方面均有提高;并具有较高的热稳定性和很好的耐受pH变化的能力。
PLPE添加于生、熟猪肉肉糜中的应用实验结果表明,PLPE可显著提高生、熟肉制品的氧化稳定性,尤其对熟肉制品的氧化稳定性有良好的效果,具有代替合成抗氧化剂的潜力。
采用Sephadex LH-20柱色谱分离出5个级分,筛选出总酚含量高、清除DPPH活性高的级分C、D和E;采用HPLC-PDA分析揭示级分C中存在有原花青素B2和表儿茶素;采用HPLC-MS-MS分析揭示级分D和级分E中含有12个原花青素低聚体,其中7个为二聚体,5个为三聚体;在二聚体中,除1个为B型原花青素即原花青素B4外,其余6个化合物均为A型二聚体,其中1个为原花青素A2,即表儿茶素--(4β→8,2β→O→7)--表儿茶素;在5个原花青素三聚体中,有1个A型三聚体,该化合物为表儿茶素--(4β→8,2β→O→7).表儿茶素--(4β→8)--表儿茶素,1个B型三聚体,3个A型--B型三聚体。