天然免疫系统是机体抵御病原微生物侵入的重要屏障，也是机体获得适应性免疫反应的基础。Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)的产生和分泌是天然免疫应答的一个很重要的方面，其主要包括IFN-α和IFN-β。本课题将猪抗病毒天然免疫信号通路作为切入点，克隆了该通路中的关键分子E74样因子4(poELF4)基因，并对其在IFN-β信号通路中的功能进行了深入研究。主要研究内容如下:　　1.猪ELF4基因的克隆、序列分析及组织表达差异分析　　以提取的PK-15 RNA反转录的cDNA为模板，首次克隆得到了poELF4基因，该基因开放读码框全长为1989bp，编码662个氨基酸。同源序列比对发现poELF4与人ELF4(huELF4)基因同源性高达91.57％，与鼠ELF4的同源性为78.58％。进化树分析表明poELF4在进化上单独属于一个分支。组织表达差异显示poELF4在猪胃、小肠和淋巴中的表达量比较高，并以小肠中的表达量最高。　　2.猪ELF4参与激活IFN-β信号通路　　抗病毒天然免疫信号通路中的许多关键分子参与激活IFN-β信号通路。将poELF4真核表达质粒分别与猪源IFN-β启动子荧光素酶报告质粒IFN-β-luc、猪源IRF3荧光素酶报告质粒IRF3-luc以及内参质粒海参荧光素酶报告质粒pRL-TK共转染至猪小肠粘膜上皮细胞(SIEC)、猪肾细胞(PK-15)、猪肾上皮细胞(IBRS-2)，双荧光素酶检测显示poELF4能显著激活IFN-β-luc和IRF3-luc，并呈现剂量依赖。核定位实验表明，超表达poELF4不能促进IRF3入核。　　3.猪ELF4激活IFN-β的功能域分析　　根据软件预测poELF4有8个结构域，因而构建了8个缺失突变体。双荧光素酶实验显示分别缺失NLS、ETS、53-86(Acidic domain)和T2B区域以后，poELF4激活IFN-β的能力下降，而缺失其它区域没有影响，说明NLS、ETS、53-86(Acidic domain)和T2B区域是猪ELF4激活IFN-β的关键结构域。有文献报道huELF4缺失360-347（Serine/threonine rich domain）区域后不能诱导干扰素产生，主要是因为该区域缺失后huELF4不能被磷酸化，进而不能入核。核定位实验显示poELF4缺失NLS区域后定位于细胞浆，而缺失306-347(Serine/threonine rich domain)区域后依然能够入核，提示其可能存在其它的磷酸化位点。　　4.猪ELF4参与SeV、poly(I∶C)、poly(dA∶dT)诱导的IFN-β产生　　以poELF4的干扰分子转染PK-15细胞，利用IFN-β启动子荧光素酶报告质粒检测了内源性poELF4对SeV、poly(I∶C)、poly(dA∶dT)诱导的IFN-β产生的影响，结果显示干扰内源性poELF4后显著抑制由SeV、poly(I∶C)、poly(dA∶dT)诱导的IFN-β产生，并呈剂量依赖性，说明poELF4参与SeV、poly(I∶C)、poly(dA∶dT)诱导的IFN-β产生。　　5.猪ELF4对病毒增殖的影响及病毒感染对猪ELF4表达的影响　　为了分析poELF4对病毒增殖的影响，以PRV和PRRSV分别作为DNA病毒和RNA病毒的代表，在细胞中超表达或干扰poELF4，通过TCID50检测或结合PFU检测、荧光定量PCR和Western blot检测，证实poELF4对PRV和PRRSV增殖有显著的抑制作用。此外，在体外细胞培养中，PRRSV感染、SeV感染及poly(I∶C)和poly(dA∶dT)刺激均能够促进poELF4的表达，但PRV感染对poELF4的表达影响不显著。