MCTs,CD147复合体表达与非小细胞肺癌预后的相关性及复合体生物学功能研究

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背景:肺癌是中国乃至世界癌症相关死亡的首要原因。非小细胞肺癌(Non-smallcell lung cancer, NSCLC)占全部肺癌的75-85%,未经治疗的转移性NSCLC患者中位生存期仅为4-5个月。目前为止,NSCLC的预后判断主要依据TNM分期及临床经验,近年越来越多的研究关注遗传因素在NSCLC发生及进展中的作用。单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)可较好的反映个体遗传背景,检测灵敏方便,对NSCLC发病风险评估及预后判断有广阔的应用前景。肿瘤代谢的主要产物乳酸通过单羧酸转运体家族(Monocarboxylatetransporter,MCT)排出细胞。已有研究显示MCTs在肿瘤中表达升高;MCTs1-4需要伴侣蛋白CD147协助其正确转位至细胞膜。免疫球蛋白超家族的成员CD147/EMMPRIN(细胞外基质金属蛋白酶诱导剂)在肿瘤细胞中高表达,并与多种肿瘤恶性程度显著相关。汉族人群中MCTs和CD147的功能性SNP位点与NSCLC预后的相关性,以及该复合体在NSCLC中的构成和表达水平与NSCLC预后的相关性是本研究的目的。方法和结果选取SLC16A1(MCT1)、SLC16A7(MCT2)、SLC16A3(MCT4)和basigin(CD147)基因共13个功能性SNP位点,用Mass ARRAY飞行时间质谱生物芯片系统进行SNP基因型检测,结合NSCLC患者临床及随访资料进行统计学分析。结果显示:basigin基因SNP位点rs4919859杂合型(wv)和突变纯合型(vv)较野生纯合性(ww)患者死亡风险降低(HR=0.70,P=0.043);SLC16A1的rs1049434位点上含有突变的肺鳞癌患者(wv/vv)较野生纯合型(ww)患者死亡风险降低(HR=0.75, P=0.048)。基因的突变位点有可能影响蛋白的表达,我们对334例NSCLC患者的肿瘤标本进行了MCT1、MCT4和CD147的免疫组化染色,结果显示,MCT1、MCT4和CD147分子在NSCLC组织中均显著高表达;MCT1、CD147主要定位于细胞膜,MCT4定位于细胞浆;MCT1和CD147的表达量与NSCLC患者生存率呈负相关。CD147和MCT1分子的表达水平在肺癌组织中具有相关性(P <0.001)。免疫组化荧光双标实验证实CD147和MCT1分子在肺癌组织中的表达存在共定位。进一步的免疫共沉淀实验显示,CD147和MCT1蛋白能高度特异的相互沉淀,这表明该复合体存在于肺癌细胞中。MTT实验、平板克隆形成实验发现:MCT1和CD147低表达能够协同抑制肺癌细胞系A549、SPC-A-1、PLA-801-C的增殖;MCT1与CD147高表达能够协同促进肺癌细胞系A549、SPC-A-1、PLC-801-C的增殖。结论MCT1、CD147编码基因特定SNP位点对NSCLC患者预后有重要意义;MCT1和CD147在NSCLC组织中的表达与患者预后相关,二者能够在NSCLC肺癌细胞表面形成复合体,并且对肺癌细胞增殖有显著的促进作用。MCT1-CD147有成为NSCLC患者术后预后评估的新的生物标志物的巨大潜力。
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