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利用微生物对有机磷农药的降解性能消除其在环境中的残留,是治理环境污染的一项有效手段。甲基对硫磷(methylparathion,以下简称MP)又称甲基1605,是一类目前广泛使用的高毒有机磷农药,其主要中间代谢产物为对硝基苯酚(ρ-nitrophenol,以下简称PNP),易溶于水,具有中等毒性。由于二者都具有苯环结构,残留期很长,给人类健康造成潜在威胁。本文从华阳农药厂污水处理曝气池中分离,筛选到了多株能降解甲基对硫磷的菌株。其中菌株Yw12,Yw15,Yw18,Yw28具有较好的降解性能。Yw12能以甲基对硫磷为唯一碳源,磷源,对硝基苯酚为唯一碳源生长,经鉴定,为根癌农杆菌( Agrobacterium.tumefaciens )。Yw15,Yw18,Yw28,能以甲基对硫磷和对硝基苯酚为唯一碳源生长,经鉴定,为苍白杆菌(Ochrobacterum sp.)四株菌的16S rDNA序列在Genbank中的注册号分别为DQ468100,DQ468101, DQ468102和DQ468103。并对四株菌进行了系统发育分析。分别用气相色谱法和分光光度法对四株菌的降解性能进行了研究,结果表明四株菌在0.5小时内对50mg/L甲基对硫磷的降解率达90%以上;在8小时内能将50mg/L对硝基苯酚完全降解。四株菌也同时能够在以甲胺磷,辛硫磷,毒死蜱,克百威,溴氰菊酯,阿特拉津为唯一碳源的基础培养液中生长,表明四株菌具有广泛的农药降解谱。用多种方法提取四株野生型菌的质粒,只有用碱法大量提取时发现有比其基因组大的条带出现,根据国内外报道有的野生型菌株的质粒大于其基因组,推测Yw15,Yw18,Yw28三株菌中可能存在大质粒,但用紫外线,电穿孔,变温SDS等质粒消除的方法均没消除掉,可能条件有待于改进。以四株菌基因组为模板,用PCR法克隆其水解酶基因mpd。将克隆到的菌株Yw12 ,Yw15,Yw18,Yw28的mpd基因进行测序,其结构基因全长为998bp, 999bp,998bp,999bp。基因注册号分别为:DQ843605,DQ843606,DQ843607,DQ843608。测序结果在Genebank nucleic-nucleic Blast进行比对,发现它们与其它甲基对硫磷降解菌的mpd基因同源性高达99%,说明甲基对硫磷水解酶结构基因mpd具有非常高的保守性,四株菌的mpd基因可能是甲基对硫磷水解酶基因的同源基因。四株菌全细胞粗酶液SDS-PAGE电泳表明,其甲基对硫磷降解酶在菌体中呈组成型表达,且初步确定四株野生型菌株MPD水解酶属于胞内酶。