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人肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种由体内激活的单核巨噬细胞产生的细胞因子。体内外试验表明其对多种肿瘤细胞株有显著的杀伤作用，尤其是局部应用TNF-α进行抗肿瘤治疗的效果明确。TNF-α是一由157个氨基酸组成的非糖基化多肽蛋白，分子量为17350Da；其生物活性形式为三聚体。目前重组TNF-α主要在大肠杆菌中克隆和表达。但是大肠杆菌的生长需要较多贵重的生化制剂；此外大肠杆菌自身含有毒蛋白，从而使大肠杆菌表达的TNF-α纯化工艺复杂化。蓝藻是一类光合自养原核生物，可作为各类生化过程研究的理想模式。由于蓝藻的生长只需阳光、二氧化碳和少数无机盐，其自身一般不含毒蛋白；加上蓝藻的大规模培养具有经济和洁净等特点，因此可将蓝藻作为大肠杆菌重组DNA产品生产的替代宿主。为探讨利用重组蓝藻进行抗肿瘤细胞因子生产的可能性，我们将人TNF-α基因转入单细胞丝状鱼腥藻7120中表达，并对表达产物进行初步的纯化。 质粒PT-TNF经EcoR I和Xho I双酶切后，分离回收含人TNF-α衍生物cDNA（0.7kb）片段。片段的Xho I酶切端经Klenow聚合酶补平后，插入质粒PRL439的psbA启动子下游，得到中间载体PRL-TNF（3.3kb）。PRL-TNF再用EcoR I和Sal I双酶切，分离含psbA启动子和人TNF-α衍生物cDNA片段并与穿梭载体PDC8重组，得到穿梭表达载体PDC-TNF（9.9kb）。 将穿梭表达载体PDC-TNF转入大肠杆菌TG1进行发酵培养。SDS-PAGE和免疫印迹分析结果显示PDC-TNF能在大肠杆菌TG1中表达分子量为17kDa的人TNF-α，表达量占菌体蛋白的10％左右。由此可推定psbA启动子可有效起始TNF-α基因的转录过程。 通过三亲结合转移方式，将穿梭表达载体PDC-TNF转入单细胞丝状鱼腥藻7120中，可获取遗传性状稳定的转化藻株。Southern杂交结果表明，人TNF-α cDNA以自主复制形式存在于PDC-TNF质粒上，其不与内源复制分子如染色体DNA和内源性质粒发生整合。SDS-PAGE和免疫印迹分析结果显示转PDC-TNF的鱼腥藻7120可高效表达人TNF-α，其表达量约占藻体蛋白的16％左右。 转PDC-TNF鱼腥藻7120的生长曲线和显微结构分析表明人TNF-α在鱼腥