双齿围沙蚕消化道D2菌株胞外蛋白酶的制备及其抗肿瘤活性的初步探讨和重组质粒pEGFP-N3-c-myc的构建

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目的培养双齿围沙蚕消化道高产蛋白酶菌株D2,分离纯化其胞外蛋白酶并研究此蛋白酶的抗肿瘤活性。方法挑取菌株D2的单个菌落,接种于肉膏蛋白胨培养液中,振荡培养,以发酵液上清为材料,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析分离纯化D2胞外蛋白酶;将分离纯化所得的D2蛋白酶粉末溶于RPMI 1640培养基中,经过滤除菌配制成浓度为0.2~2 000mg/L的蛋白酶溶液,选用鼠乳腺癌细胞EMT6作为实验组,相应细胞加入药物溶解介质为
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