半夏快繁体系的建立及次生代谢规律的初步研究

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半夏Pinellia ternata (Thunb.) Breit.为天南星科多年生草本植物,以干燥块茎入药,是历版《中国药典》收载的常用中药。本研究采用植物组织培养技术,选择合适半夏外植体、植物生长调节剂,诱导、增殖半夏类原球茎,通过液体悬浮培养方式,建立半夏快繁体系;同时研究了半夏荧光参数日变化,Ca2+对半夏类原球茎抗性相关生理生化指标的影响,以及不同培养条件对半夏次生代谢产物合成的影响。研究结果如下:1半夏叶柄基部是诱导类原球茎和愈伤组织的最佳外植体;在单因素实验中,最适宜诱导类原球茎的2,4-D浓度为0.5mg·L-1,6-BA浓度为1.5mg·L-1, NAA浓度为0.5mg·L-1, KT浓度为1.0mg·L-1;正交试验结果表明诱导的最佳条件为MS+0.1mg·L-12,4-D+0.5mg·L-116-BA+0.5mg·L-11KT。2在悬浮培养过程中,半夏类原球茎生长曲线呈“s”型;最利于类原球茎增殖的2,4-D浓度为0.5mg·L-1;最利于类原球茎增殖的6-BA浓度为1.0mg·L-1;6-BA与2,4-D配合使用对半夏类原球茎的增殖效应优于单独使用,最适宜增殖组合为6-BA1.0mg·L-1+2,4-D0.2mg·L-1.3一定浓度Ca2+增强半夏类原球茎对高温的抗性。Ca2+浓度在0~660mg·L-1范围内,SOD、POD活性随Ca2+浓度升高增强,至660mg·L-1时,酶活性最高,但Ca2+浓度过高(880mg·L-1),SOD、POD活性均降低。4半夏组培苗与栽培苗PSII原初光能转化效率(Fv/Fm)、光合量子产额(ΦPSII)、光化学猝灭系数(qP)、非光化学猝灭系数(qN)和表观电子传递速率(ETR)均存在着明显的日变化规律。其中Fv/Fm、ΦPSII、qP均呈先下降后上升的趋势,在中午强光下降低到最低值;qN则呈先上升后下降的趋势,在中午时分达到峰值;ETR日变化呈双峰曲线。5无糖条件下半夏类原球茎无法生长,蔗糖浓度为30g·L-1、15g·L-1时,生物碱、游离有机酸含量最高,但对鸟苷含量影响不大。2,4-D浓度不超过0.5mg·L-1时,半夏类原球茎正常生长,浓度过高时,明显抑制生长;2,4-D对半夏类原球茎中总游离有机酸、鸟苷含量影响显著,浓度为0.2mg·L-1、1.0mg·L-1时,总游离有机酸、鸟苷含量分别达到最高;但2,4-D对生物碱含量影响不大。不同浓度6-BA处理半夏类原球茎总生物碱含量均高于2,4-D,浓度为1.0mg·L-1的处理,生物碱含量最高;6-BA浓度为1.5mg·L-1、0.5mg·L-1时,总游离有机酸、鸟苷含量最高。不同浓度的Ca2+处理半夏类原球茎生长速率、生物碱、鸟苷、有机酸含量差异显著,Ca2+浓度为440mg·L-1时,生长速率、生物碱含量(0.158%)最高,Ca2+浓度为660mg·L-1时,鸟苷、有机酸累积量最高(分别为0.0173%、0.608%)。
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