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目的以肾透明细胞癌组织和相关细胞系为基础,以过表达和敲低技术为技术手段,探讨肾透明细胞癌组织中PRDX3的表达与癌症发展的关系,初步解释PRDX3参与癌症发展的分子机制。方法本研究首先选用16例肾透明细胞癌组织及癌旁组织,采用western blot的方法验证PRDX3的表达情况。通过定量蛋白质组技术分析肾透明细胞癌组织及癌旁组织中差异蛋白的表达情况,同时验证PRDX3的表达量。以组织中PRDX3的表达量为参照,构建PRDX3重组慢病毒载体以及PRDX3 RNA干扰的病毒载体,分别转染肾透明细胞癌786-0细胞系,构建PRDX3过表达细胞系及敲低表达细胞系,同时建立对照细胞系。qPCR和western blot分别验证PRDX3的过表达和敲低表达效果。通过CCK-8试验,检测PRDX3过表达和敲低表达后肿瘤细胞的生长情况。通过pull-down试验联合LC-MS/MS技术寻找PRDX3的相互作用蛋白。初步探究PRDX3与PRDX1的相互作用关系及PRDX3参与肾透明细胞癌发展的分子机制。结果16例肾透明细胞癌组织样本的western blot检测结果表明,有14例样本PRDX3下调表达,下调均值1.78倍左右。定量蛋白质组学结果表明,16例样本中有12例存在PRDX3的下调表达,下调均值为1.89倍(cutoff值为1.35倍),结果与western blot结果基本一致。成功筛选到PRDX3过表达和敲低表达的786-0单克隆细胞系和对照细胞系,标记为 7860-PRDX3(+)、7860-PRDX3(-)、7860-PRDX3 KN、7860-PRDX3 NCi。qPCR 和 western blot 结果表明,相比 7860-PRDX3(-)组,7860-PRDX3(+)组在mRNA水平过表达约2.1倍,在蛋白水平过表达约1.8倍;相比7860-PRDX3 NCi组,7860-PRDX3 KN组在mRNA水平低表达约0.48倍,在蛋白水平低表达约0.51倍。CCK-8试验表明,相比7860-PRDX3(-)组,7860-PRDX3(+)组细胞生长速率明显降低。但PRDX3敲低表达后,敲低组和其对照组细胞的生长速率却无显著性差异。Pull-down试验发现PRDX3可能与PRDX1存在相互作用。结合质谱分析及数据库检索,发现PRDX3通过二硫键与PRDX1结合并发挥作用。本研究分别通过plink软件鉴定到二者可信的结合位点,并采用定点突变的方式初步进行了结合位点的确认。初步探讨了 PRDX3参与肾透明细胞癌发展的可能机制。结论PRDX3在肾透明细胞癌组织中下调表达,可能参与了肿瘤的发展。提高PRDX3的表达水平,能显著降低肿瘤细胞的生长速率。PRDX3通过二硫键与PRDX1相互作用可能参与了肾透明细胞癌的发展过程。基于PRDX3蛋白,可能开发针对肾透明细胞癌的靶向药物。