甜椒小分子量热激蛋白基因的克隆及其在温度逆境下的功能分析

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遇到高温胁迫时植物体内会产生应急蛋白——热激蛋白,其中植物小分子量热激蛋白含量最为丰富、种类繁多。小分子量热激蛋白的分子量在17~30 kDa 之间,有保守的C端。高等植物中含有至少6种小分子量热激蛋白,分别定位于细胞质、叶绿体、线粒体、内质网。在常温下植物体内小分子量热激蛋白基因不表达,高温时小分子量热激蛋白则快速积累。近年来,关于高温诱导热激蛋白以及热激蛋白提高植物耐热性的研究取得了重要进展。然而,关于低温诱导热激蛋白基因表达及其在低温光破坏防御中作用的研究相对较少。本研究从甜椒叶片中分离到小分子量热激蛋白基因CaHSP26 和CaHSP18。表达模式和功能分析表明,这两个基因的表达受高温逆境诱导,在高温胁迫下对植物、大肠杆菌的蛋白有保护作用;低温条件下过量表达对烟草、大肠杆菌均有保护作用。主要结果如下: 1. 利用同源序列设计兼并引物,通过RT-PCR 的方法从甜椒叶片克隆到叶绿体小分子量热激蛋白基因的中间片段,通过5’-RACE 和3’-RACE 分别克隆到5’片段和3’片段,拼接后设计特异引物扩增到全长917 bp cDNA,ORF 为708 bp,编码235 个氨基酸的多肽,分子量约为26 kDa。同源序列比较发现,甜椒叶绿体小分子量热激
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