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本研究利用农杆菌介导遗传转化（ATMT）的方法构建了棉花黄萎病菌强毒菌株Vd080突变体库，并对其质量进行评价。对随机选取部分突变体进行表型分析，得到产孢量骤减、生长速率下降及致病力显著降低的突变体VdT286，成功克隆其侧翼序列，得出以下主要结论：1.本研究利用农杆菌介导遗传转化的方法，优化转化体系，成功构建了容量为2000个转化子的棉花黄萎病菌强毒菌株Vd080的突变体库。最佳转化体系是采用新鲜的农杆菌菌液和棉花黄萎病菌孢子悬浮液，农杆菌OD600为0.4左右、诱导剂乙酰丁香酮（AS）浓度为200μM、共培养温度为25℃、共培养48h，转化效率可达150～540个转化子/106个孢子。对随机挑取的突变体进行PCR验证和Southern杂交，结果表明，T-DNA成功插入到棉花黄萎病菌Vd080中，且多为单拷贝。通过继代培养进行遗传稳定性检测，得知供试突变菌株均能够稳定遗传。该转化方法操作简便，转化周期短，效率高，所得突变体单拷贝插入率高及T-DNA遗传稳定性好。2.从上述突变体库中随机选取309个转化子进行表型分析，结果表明，菌落形态不同于野生型菌株Vd080的突变体为143株，占46.3%，其中菌丝型（白色菌丝型和黄色菌丝型）为40株，占28.2%，对其中的85株突变体的生长速率、产孢量、粗毒素分泌量及致病力进行测定，生长速率显著降低的突变体为11株，占12.9%，粗毒素分泌量发生显著变化的突变体占为43株，50.1%，产孢量发生显著变化的突变体为31个，占36.5%。致病力测定结果表明，突变体致病力发生显著变化的菌株为27个，占31.8%。对突变体的生长速率、产孢量、粗毒素分泌量及致病力之间进行相关性分析，结果表明，突变菌株的各指标之间不存在相关性。3.在对突变体表型筛选的过程中，得到一株产孢量骤减、生长速率降低及致病力也显著下降的突变体VdT286，并对其进行深入的研究。由于T-DNA的插入，突变体VdT286的产孢量极显著的低于初始菌株Vd080，相差达4个数量级；VdT286的生长素率也显著低于初始菌株Vd080；利用VdT286浓缩孢子液接菌棉株，Vd080病情指数为43.4，VdT286的病情指数为3.5，VdT286致病力极显著低于对照。对VdT286进行温度和pH敏感性试验，结果显示，在不同温度和pH值下，VdT286的生长速率均小于Vd080，但生长变化规律一致。分析两者的胞外酶活性发现，Vd080和VdT286在以脱脂奶粉、淀粉和纤维素为唯一碳源的条件下，均能够正常生长，Vd080能够产生胞外蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶，VdT286能够产生淀粉酶，其纤维素酶和蛋白酶分泌能力降低。4.本研究以T-DNA插入区域的左右边界分别设计3’和5’的特异步移引物，利用优化的TAIL-PCR体系和反应程序成功克隆了突变体VdT286的T-DNA侧翼序列，并进行序列测定。和已经测序完成的大丽轮枝菌Vdls.17基因组进行比对，得知该基因是一个葡萄糖阻遏蛋白VdGR1(代码)，全长为3201bp，包括7个外显子和6个内含子，cDNA的长度为2679bp，编码892aa。本研究结果表明该基因是一个和控制大丽轮枝菌产孢的关键基因，也是个致病相关基因。目前VdGR1在大丽轮枝菌的相关功能还未见报道，因此在本研究的基础上，对VdGR1基因功能的深入研究成为下一个研究重点。