论文部分内容阅读
从1997年起猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2, PCV2)已是研究最热的猪病原之一,作为仅次于猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的第二大严重危害世界养猪业的病毒,PCV2已呈全球范围内流行。自2000年我国报道PCV2以来,PCV2所致的发病率和死亡率始终居高不下。为了持续监测猪体中PCV2的带毒和变异情况,本研究于2012-2013年对江苏部分地区病死猪的临床病料进行PCV2、伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus, PRV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus, PPV)|猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和PRRSV五种常见病原的PCR检测,并用Dulac细胞对PCV2的阳性病料进行分离纯化。对分离的PCV2进行全基因序列测定和遗传进化分析,比较不同亚型PCV2b毒株在Dulac细胞和低母源抗体商品猪上的感染特性,从而为我国PCV2的流行情况和致病性研究提供依据。1.2012-2013年江苏部分地区PCV2及几种常见病原的流行病学调查用PCR方法对江苏部分地区的164份病死猪病料五种常见病原进行检测,结果70份病料为PCV2阳性,阳性率42.7%；29份病料为CSFV阳性,阳性率为17.7%；16份病料为PRV阳性,阳性率为9.8%；12份病料为PPV阳性,阳性率为7.3%；4份病料为PRRSV阳性,阳性率为2.4%；其中在混合感染中,以PCV2和CSFV的混合感染率最高,有9份,占总数的5.4%； PCV2和PRV的混合感染有8份,占总数的4.8%,排第二位；PCV2和PPV的混合感染有4份,占总数的2.4%,排第三位。2.2012-2013年江苏部分地区PCV2的分离鉴定和全基因组序列的遗传进化分析为了解江苏部分地区PCV2毒株的流行特点,本文对2012-2013年采集的病料中分离的38株PCV2扩增病毒全基因组,测序并绘制遗传进化树。结果表明,分离株全长为1768bp的1株,其余37株为1767bp。这些毒株分属PCV2b和PCV2a两个基因型,其中37株PCV2b中有11株属1B亚型,26株属1c亚型；其余1株为PCV2a基因型。对38株PCV2RF2编码氨基酸序列比对分析表明,PCV2基因型及亚型具有其特异的氨基酸变异位点。而2012-2013年间江苏部分地区的PCV2流行毒株主要为PCV2b1C亚型。3. PCV2b毒株的致病性研究为比较PCV2b I1B和1C亚型毒株的致病性差异,从本实验室保存的毒株中选择毒株121108(1B)和毒株130405(1C)。通过测定Dulac细胞在接种病毒后第1,2,3,4,5d上清液中PCV2的TCID50和DNA拷贝数,来比较两株PCV2在该细胞上的生长差异。同时为比较它们在动物体内的感染差异,随机将8头试验猪分为3组：阴性对照组2头；感染PCV2b1B (121108)组3头；感染PCV2b1C (130405)组3头。接种后第7、14、21d采集血样检测PCV2的抗体和DNA水平。结果表明：在Dulac细胞上,与毒株130405(PCV2b1C)相比,毒株121108(PCV2b1B)在上清液中的感染滴度和病毒拷贝数均高出10倍(P<0.01)。在动物体内,起初毒株121108(PCV2b1B)就处在较高的复制水平,两毒株在攻毒后第7d均达到复制水平的高峰。比较攻毒后第14、21d试验猪血清中PCV2DNA拷贝数发现,121108组显著高于130405组(P<0.05)。攻毒后21d的剖检结果也表明,121108组试验猪淋巴结和各脏器的大体和显微病变都比130405组严重。121108组试验猪的淋巴结出现多核巨细胞和嗜酸性粒细胞,且有大量的淋巴细胞缺失,130405组未见多核巨细胞,淋巴细胞缺失也较少。免疫组化结果也表明121108组试验猪的淋巴结和扁桃体中分布的PCV2抗原更多。总而言之,本文研究结果表明,1B亚型毒株121108的感染性明显强于1C亚型毒株130405。