【摘 要】
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孢子丝菌病主要是由孢子丝菌引发的人畜共患的疾病,近几十年来,孢子丝菌病的发病率逐年增加,并且广泛分布于世界各地,在我国主要流行于东北三省及长江中下游地区,且呈地方性或职业性的局部流行。申克孢子丝菌是一种双相型真菌,具有菌丝相和酵母相,其中酵母相是该菌的致病相。申克孢子丝菌的双相型转变是由多因素共同参与的复杂过程,调控该过程的关键基因仍需要进行深入探究。我们对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相进行转录组分析
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孢子丝菌病主要是由孢子丝菌引发的人畜共患的疾病,近几十年来,孢子丝菌病的发病率逐年增加,并且广泛分布于世界各地,在我国主要流行于东北三省及长江中下游地区,且呈地方性或职业性的局部流行。申克孢子丝菌是一种双相型真菌,具有菌丝相和酵母相,其中酵母相是该菌的致病相。申克孢子丝菌的双相型转变是由多因素共同参与的复杂过程,调控该过程的关键基因仍需要进行深入探究。我们对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相进行转录组分析,发现AbaA基因在双相中差异表达。鉴于前人对AbaA基因的研究,发现该基因能够编码一个ATTS/TEA的DNA结合域转录调控因子,并且该基因在双相型真菌马尔尼菲篮状菌中能够调控双相转变,但在申克孢子丝菌中AbaA基因从未进行研究,因此我们通过构建AbaA敲除菌株,来初步研究AbaA基因在申克孢子丝菌中的功能,现研究结果如下:1.对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相转录组进行比较,发现有12,217个基因差异表达,其中有7271个基因上调表达和4946个基因下调表达。我们对申克孢子丝菌转录组中与双相转换信号通路相关的差异表达基因进行进一步的统计分析,发现AbaA基因在双相中差异表达,其|log2FC|=-1.705;2.对转录组数据进行分析及查阅相关文献后,认为AbaA基因可能对申克孢子丝菌的双相转变及致病性发挥重要作用。利用重叠延伸PCR来合成敲除片段,将敲除片段连接到PCB309载体上,成功构建敲除质粒;将敲除质粒通过根癌农杆菌介导转化到申克孢子丝菌体内,筛选得到敲除菌株;3.比较野生型菌株和AbaA基因敲除菌株诸多方面的差异,研究结果表明敲除菌株与野生型菌株相比,黑色素生成量明显减少,在菌丝相和酵母相的生长速度均延迟,无法从菌丝相完全转变为酵母相,仅能转换为雪茄状的过渡态,对刚果红的敏感性降低,但对SDS和酵母溶菌酶的敏感性增加,且对渗透胁迫的耐受力下降。综上,初步确定了AbaA基因在申克孢子丝菌的双相转换过程中的重要作用,并且推测AbaA基因能够通过影响黑色素的生成、菌丝和酵母细胞的生长、渗透胁迫的耐受性和细胞壁的组成成分,可能进一步影响该菌的致病能力,这为深入研究申克孢子丝菌的基因功能、其致病机理,以及寻找药物靶标奠定基础。
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