昆虫虫体和昆虫细胞表达系统是高级的真核表达系统之一，其在蛋白翻译后的加工折叠及糖基化、磷酸化等修饰方面是近似于哺乳动物细胞的表达系统。用杆状病毒载体表达系统在昆虫虫体或者细胞超量表达外源蛋白的研究很多，已经表达出多种有功能的蛋白以及蛋白复合体。昆虫细胞表达系统的发展迅速，大规模培养系统，无血清培养基的研究等方面都有很大进展，目前悬浮细胞规模培养进行重组病毒生产应用与昆虫杀虫剂，重组蛋白表达生产药用蛋白等方面开始应用。昆虫细胞表达系统根据不同的需要含有多种载体系统，有的使用病毒极早期基因启动子构建的瞬时表达和稳定细胞系构建载体，也有应用病毒极晚期启动子的杆状病毒载体系统，以及应用昆虫内源性启动子的转基因昆虫/昆虫细胞的载体系统。　　 A3启动子是家蚕肌动蛋白actin3启动子，是家蚕转基因中应用比较广泛的一个内源性启动子，多用于piggyBac系统中驱动外源基因和转座酶基因。本实验克隆到一个新的A3启动子，通过生物信息学软件进行了多序列比较以及启动子元件分析。为了确定A3启动子的活性，选取了来源于粉蚊夜蛾多角体病毒OpMNPV的极早期启动子ie2和来源于苜蓿银纹夜蛾多角体病毒AcMNPV病毒的极晚期基因polh启动子，比较了三者活性差异。ie2启动子是一个在昆虫细胞的瞬时和稳定细胞系载体中常用的启动子，其瞬时表达和稳定细胞系中表达活性较强，而polh启动子是杆状病毒多角体基因启动子，是杆状病毒表达系统中常用的启动子，在病毒感染细胞的极晚期超量表达。本研究用lacZ基因做报告基因，构建了瞬时表达载体pFA3lacZ和pFIE2lacZ，分别转染Sf9细胞和BmN细胞，比较A3启动子和ie2启动子在两种细胞中的瞬时活性的差异，同时用杆状病毒作载体比较了A3和ie2启动子在病毒感染细胞早中期的动态活性的差异。病毒感染极晚期细胞悬浮或裂解对β-galaetosidase酶活性的测定有一定影响，为了更精确地比较A3启动、ie2启动子和极晚期的polh启动子在杆状病毒感染Sf9细胞的极晚期的活性，以增强型的绿色荧光蛋白EGFP作报告基因，构建了重组病毒AcNPV-A3EGFP，AcNPV-ie2EGFP和AcNPV-polhEGFP三种重组病毒，感染Sf9细胞测定其在72 h时的表达量的差异。　　 结果证明本研究中新克隆的A3启动子的序列同GenBank中已有序列均有差异(登陆号：HQ918291)。通过启动子序列元件分析比较可以发现新克隆的A3启动子同库中的序列以及现在应用在表达质粒的A3启动子相比其关键表达调控元件没有明显突变，可以作为表达用启动子。　　 瞬时表达活性鉴定的结果证明在Sf9细胞中ie2启动子的活性约是A3启动子活性的38倍，而在BmN细胞中ie2启动子是A3启动子的28倍。横向比较结果也证明ie2和A3启动子的活性在Sf9细胞中分别是BmN细胞中的3倍和2.2倍。这一结果也证明了ie2启动子较A3启动子更合适做昆虫细胞的瞬时表达启动子，而Sf9细胞更适合作为表达的昆虫细胞系。　　 用杆状病毒AcNPV做载体比较A3启动子和ie2启动子在感染Sf9细胞的早、中、晚期的活性动态变化，以及与感染病毒的极晚期polh启动子总的表达量进行了比较，结果表明：ie2启动子在病毒感染的12 h之前，表达量较A3启动子高。而A3启动子的表达量在病毒感染48 h时最高，大约是ie2启动子活性的10倍，此时polh启动子表达的荧光才开始检测得到。而在病毒感染的极晚期即72 h，polh启动子的表达量远高于A3启动子的表达量，大约是A3启动子的5倍。这一结果也证明了A3启动子在病毒感染的早期、晚期均有很高的活性，而polh启动子在病毒感染的极晚期活性很高。以上结果也证明三种启动子在杆状病毒载体上时序性表达互补性强，可以根据不同需要选择合适的启动子。