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目的:本文通过评估兔角膜缘干细胞在京尼平交联的壳聚糖-胶原(ChitosanCollage,Ch-Col)支架材料上的黏附和增殖情况,以及支架材料对细胞的毒性,并观察兔角膜缘干细胞在支架材料上的黏附和生长过程,以及细胞形态学变化。初步证实经过京尼平交联的Ch-Col和兔角膜缘干细胞具有良好的生物相容性。方法:本研究将胶原与壳聚糖按3:1混合,京尼平交联,冷冻干燥制成实验组支架材料;另一组不经过京尼平交联,直接将胶原与壳聚糖按3:1混合,冷冻干燥制成对照组支架材料。分离培养兔角膜缘干细胞,免疫荧光法检测传代后的LSCs的p63表达情况,并将细胞接种于经京尼平交联的Ch-Col(实验组)、Ch-Col支架(对照组)、空白孔板(阴性对照组)。利用光学显微镜观测。应用MTT法检测细胞在实验材料上的黏附及增殖情况。结果:支架材料大体观,两组支架之间并无显著差别。电镜下京尼平交联的Ch-Col支架材料具有较多空隙,各孔隙间相互连接;而未经京尼平交联的Ch-Col支架材料空隙模糊,几无架构特征。细胞接种后显微镜下观察:其中接种支架的实验组与对照组角膜缘干细胞更加致密、拥挤,阴性对照组的角膜缘干细胞间距较为疏松,细胞数量随观察天数的增加逐渐增多,成长可,未见明显坏死情况。MTT法检测角膜缘干细胞在支架上的增殖情况及细胞毒性实验结论表明:早期实验组和对照组的吸光度值均小于阴性对照组(P<0.05),组间差异有意义;且随着观测天数的增加,实验组与对照组的吸光值都渐渐增大,而后期实验组与对照组显著优于阴性对照组(P<0.05),且这种差别随时间越来越大。根据观测天数的增加,实验组与对照组的吸光度值越来越优于阴性对照组(P<0.05)。实验组与对照组的吸光度值差异没有明显统计学差异(P>0.05)。实验组和对照组支架材料的细胞毒性评级均为0。结论:表明京尼平交联的Ch-Col组织工程支架和兔角膜缘干细胞具有良好的亲和力,细胞能在支架上良好地黏附、迁移和增殖;交联后的支架材料具有优异的三维空间结构,能够为细胞的生长和增殖提供更为广阔的空间。京尼平交联使Ch-Col复合物的缺点得到弥补,且并未产生明显的细胞毒性。