目的:酒精滥用可通过诱导氧化应激,细胞凋亡等多种作用机制导致中枢神经系统损伤,影响注意力、记忆力、认知力及运动功能,严重时引起韦尼克脑病,科萨科夫综合症,阿尔茨海默氏病,痴呆及周围神经病变等多种神经系统疾病。姜黄素是天然多酚类化合物,具有抗氧化应激,抗神经元凋亡等多种生物学功能。本课题采用乙醇诱导的PC12细胞毒性作为酒精性神经元损伤的体外模型,探讨姜黄素对乙醇诱导的神经元损伤的保护作用机制。方法:培养PC12细胞,用不同浓度乙醇溶液处理PC12细胞,建立、筛选乙醇诱导的PC12细胞损伤模型,并用不同浓度姜黄素溶液处理PC12细胞24h,观察姜黄素对细胞活力的影响。通过CCK-8检测不同浓度姜黄素（1.25,2.5,5,10,20μM）对乙醇诱导的PC12细胞存活率的影响,确定姜黄素的最佳保护浓度;分别采用乳酸脱氢酶（LDH）及超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒测定不同浓度姜黄素对乙醇诱导的PC12细胞中LDH释放及SOD含量的影响;采用Hoechst33342进行荧光染色观察姜黄素对乙醇诱导的PC12细胞凋亡的影响;通过双向电泳及液相色谱串联质谱分析姜黄素对乙醇诱导的PC12细胞中蛋白表达的影响。结果:实验结果表明400m M的乙醇持续干预24h可作为乙醇诱导PC12细胞损伤的最适条件;并且用不同浓度姜黄素处理PC12细胞24h,细胞活力未见明显差异（P>0.05）。与400m M乙醇处理的细胞相比,用400m M乙醇和5μM姜黄素混合溶液处理PC12细胞24h可显著增加细胞活力（P<0.001）,降低细胞中LDH释放（P<0.001）,增加细胞中SOD含量（P<0.01）,抵抗乙醇诱导的氧化应激;Hoechst 33342荧光染色表明姜黄素可抑制乙醇诱导的细胞凋亡。此外,蛋白质组学表明姜黄素处理可上调乙醇诱导的PC12细胞中脑衰反应调节蛋白2（CRMP-2）,热休克蛋白90k Daβ（Hsp90b1）,磷酸化应激诱导蛋白1（STIP1）,α-烯醇化酶（ENO1）,异柠檬酸脱氢酶（IDH3）,ADP/ATP转位酶1（Slc25a4）,ATP合酶（Atp5f1a）的表达。差异表达蛋白经生物信息学分析显示CRMP-2主要参与神经元发育及轴突的生长;Hsp90b1和STIP1作为分子伴侣参与蛋白的加工、转运、折叠及降解;其余蛋白主要与能量代谢有关。结论:姜黄素可通过抑制乙醇诱导的PC12细胞氧化应激及凋亡发挥神经保护作用,其抗凋亡作用机制可能与PI3K/Akt/GSK-3β/CRMP-2信号通路有关。此外,Hsp90b1,STIP1,ENO1,IDH3,Slc25a4,Atp5f1a可能参与姜黄素对乙醇诱导的PC12细胞毒性的保护作用。