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本文研究了脂联素对鸡原代肝细胞、成肌细胞和脂肪细胞脂质代谢的影响及机制。通过外源添加重组脂联素蛋白和腺病毒过表达的方法,探究了脂联素对鸡脂质代谢的调控作用,旨在深入了解家禽的脂肪代谢调控机制,为改善家禽生产性能,提高饲料转化率和治疗肥胖等代谢疾病提供新的思路。试验一研究重组脂联素对鸡原代肝细胞脂质代谢的影响及机制。首先,用棕榈酸(饱和脂肪酸)和油酸(不饱和脂肪酸)预处理,探究重组脂联素梯度添加后对鸡原代肝细胞脂质代谢的影响,研究结果表明重组脂联素能够降低(P<0.05)细胞内脂质含量,5μg/mL重组脂联素降脂作用更为显著;相比油酸条件下,棕榈酸条件下重组脂联素降脂作用更加明显。接下来,选取棕榈酸和5μg/mL重组脂联素研究其对脂质代谢的具体作用机制。研究结果表明重组脂联素能够降低细胞内脂质含量,增加(P<0.05)肝细胞上清液中甘油三酯(TG)和极低密度脂蛋白(VLDL)的含量。棕榈酸预处理后,重组脂联素显著(P<0.01)增加了脂合成基因(FAS、ACC、PPARγ和SREBP1)的mRNA表达,同时有增加脂肪酸合酶(FAS)(P=0.07)和苹果酸酶(ME)(P=0.08)活性的趋势。另外,脂肪酸氧化基因肝型-肉碱脂酰转移酶1(L-CPT1)mRNA显著(P<0.05)下调,脂联素受体2(ADPNR2)和过氧化酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA显著(P<0.05)升高。重组脂联素还显著(P<0.01)增加了肝细胞葡萄糖和脂肪酸摄取。AMPK/ACC/CPT1信号通路及相关蛋白PGC1α和PGC1β在不同时间点的蛋白变化并不一致。以上结果提示脂联素可能通过与ADPNR2结合,促进肝细胞对脂肪酸和葡萄糖的摄取,同时加强了TG和VLDL由胞内向胞外转运,由此降低了肝细胞脂肪沉积。这与脂联素在哺乳动物及其他家畜中发挥作用的机制并不一致。试验二研究重组脂联素对鸡原代成肌细胞脂质代谢的影响及机制。试验分为四个处理组:对照组,重组脂联素组,棕榈酸处理组,重组脂联素与棕榈酸联合处理组。研究结果表明重组脂联素在不影响成肌细胞活力的前提下能够显著(P<0.05)降低细胞内脂质含量(TG和TCH)。脂联素受体1(ADPNR1)和ADPNR2基因的mRNA表达均显著(P<0.05)上调,说明脂联素主要通过与脂联素受体结合发挥作用。另外,重组脂联素显著(P<0.05)影响了脂代谢基因FAS、ACC、PPARγ、PGC1α、PPARα、L-CPT1、ATGL和FATP1转录水平的表达,促进了(P<0.01)成肌细胞对葡萄糖和脂肪酸的摄取。此外,重组脂联素激活了AMPK/ACC/CPT1信号通路,棕榈酸预处理后添加重组脂联素处理的激活作用更为显著(P<0.05)。用AMPK抑制剂(Compound C)处理的结果证明,棕榈酸预处理后,添加重组脂联素降低了TG(P<0.001)和TCH(P=0.08)含量,但是Compound C预处理1 h,这种现象得以改变,TG和TCH显著(P<0.01)增加。同时,AMPK、ACC磷酸化水平以及PGC1β蛋白恢复至正常水平。综上所述,重组脂联素能够降低成肌细胞内脂质含量,主要通过与脂联素受体结合,激活AMPK通路,增加成肌细胞对葡萄糖和脂肪酸的摄取,促进细胞脂质氧化利用。试验三研究脂联素对鸡原代脂肪细胞脂质代谢的影响及机制。首先,用重组脂联素处理脂肪细胞,结果表明重组脂联素能够显著(P<0.001)促进脂肪细胞对葡萄糖和脂肪酸的摄取,显著(P<0.001)降低细胞内脂质含量,油红O染色和Bodipy染色结果显示脂滴变小,FAS酶活性显著(P<0.05)降低。此外,重组脂联素并没有对ACC、CPT1及PGC1α和PGC1β的蛋白表达产生显著影响,但1 h时,AMPK显示被抑制。结果提示,重组脂联素可能主要通过促进脂肪细胞葡萄糖和脂肪酸摄取,抑制FAS酶活,从而抑制脂肪细胞的脂质合成。另外,重组脂联素处理后,脂肪细胞的脂联素mRNA表达显著(P<0.01)下调,这说明脂联素在脂肪细胞内存在负反馈机制。其次,通过腺病毒过表达球状脂联素方法处理脂肪细胞,结果显示,腺病毒过表达球状脂联素显著(P<0.05)增加了细胞内外脂质含量,显著(P<0.05)增加了脂联素及其受体的mRNA表达以及细胞上清液中脂联素含量,脂代谢基因PPARγ、SREBP1、PPARα的mRNA表达均发生显著(P<0.05)变化,而且磷酸化AMPK显著(P<0.01)增加。以上结果表明腺病毒过表达球状脂联素能够增加脂肪细胞内外脂质含量,激活AMPK。综上结果表明,脂联素在鸡原代肝细胞和成肌细胞中均起到降脂作用,但其发挥作用机制并不相同。对于鸡原代脂肪细胞,外源添加重组脂联素和内源腺病毒过表达球状脂联素的脂质代谢作用并不一致,但均影响到了磷酸化AMPK水平。