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背景和目的肺癌是目前世界上导致肿瘤相关性死亡最主要的原因。根据最新出版的肿瘤学年鉴,2015年美国新发肺癌221200例,死亡158040例。根据病理分类,肺癌主要包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌,其中前者占了80-85%。近年来,尽管我们在肺癌的诊断和治疗上取得了很大进展,但是大部分肺癌首次就诊时已属晚期,其5年生存率仅有15%左右。肺癌治疗上的失败和预后差主要是由于肿瘤进展、转移或复发。因此,很有必要寻找能够评估肺癌预后及预测疗效的新的潜在靶点。细胞周期蛋白B2 (cyclinB2,CCNB2)是细胞周期蛋白家族的一个成员,通过激活CDK1激酶,CCNB2可以启动细胞周期中G2/M转换。最近,越来越多的研究显示,CCNB2在多种肿瘤中高表达,例如,肾上腺肿瘤、乳腺癌、结直肠癌、垂体瘤和胃癌。另外,已有文献报道,肿瘤病人在血浆中循环的CCNB2 mRNA升高,并且与肿瘤的分期和转移有关。但是,关于CCNB2表达在非小细胞肺癌发生、发展中所扮演的具体作用及临床预后价值尚未清楚。为此,我们进一步探究CCNB2在NSLCL患者的临床病理及预后生存之间的关系。本研究目的包括以下几点：1) NSCLC患者CCNB2mRNA在癌组织与癌旁正常组织的表达差异；2) CCNB2蛋白与NSCLC患者的临床病理特征之间的关系,如,性别、发病年龄、是否吸烟、病理类型、分化程度、肿瘤大小、淋巴转移、远处转移和临床分期；3) CCNB2蛋白表达水平与NSCLC患者的预后生存之间的关系。材料和方法1从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)检索跟肺癌有关的mRNAprofing studies,Lu等报告的60对肺癌及癌旁正常肺组织标本的表达谱研究数据,进一步研究CCNB2在肺癌中的表达。从南方医院和阜阳市第五人民医院收集了20对新鲜冷冻的非小细胞肺癌标本,所有的样本立即保存在液氮中。本研究搜集了于2008年1月1日至2014年6月30日就诊于南方医院、阜阳第五人民医院、黄冈医院中心医院、阜阳第二人民医院、和阜阳肿瘤医院的186例石蜡包埋的非小细胞肺癌组织样本和31例石蜡包埋的正常肺组织样本。RT-PCR检测癌组织、癌旁正常肺组织CCNB2 mRNA表达水平,免疫组化法检测186例NSCLC石蜡包埋标本CCNB2蛋白表达水平,分析CCNB2蛋白表达与患者临床病理资料及生存的关系。2所有的数据运用SPSS13.0软件分析,用Wilcoxon符号秩检验法检测非小细胞肺癌组织和癌旁正常肺组织间CCNB2 mRNA的表达差异。用卡方检验评估正常组织和癌组织间的CCNB2蛋白的表达差异,评估CCNB2蛋白的表达与临床病理特征之间的关系。生存分析采用Kaplan-Meier法和COX回归模型。结果1CCNB2 mRNA在癌组织和癌旁组织的表达基于Lu等人的微阵列数据(GSE19804),与癌旁正常肺组织相比,60例NSCLC组织CCNB2 mRNA高表达。为了核实NSCLC组织CCNB2 mRNA的表达情况,我们采用RT-PCR来检测20对NSCLC癌组织、癌旁正常肺组织CCNB2mRNA表达。这种表达模式类似于Lu等的微阵列数据结果。与癌旁正常肺组织相比,NSCLC组织CCNB2mRNA表达平均增长3.02倍。(P<0.001)我们检测了186例石蜡包埋NSCLC组织标本和31例正常肺组织标本CCNB2蛋白表达水平。两组CCNB2蛋白表达率分别为62.4%、29.0%(P=0.002)。2 CCNB2蛋白表达水平与NSCLC临床病理特征我们进一步分析了NSCLC患者CCNB2蛋白表达与临床病理特征之间的关系。可以得出：CCNB2蛋白过度表达与组织分化程度、肿瘤大小、淋巴转移、远处转移和临床分期显著相关(P<0.05)。但与性别、年龄大小、吸烟状况和病理分期无明显相关(P>0.05)。3 CCNB2蛋白表达水平与非小细胞肺癌预后分析3.1全组病人的总生存期及预后因素分析本研究的随访截止日期为2014年12月31日,随访的时间介于5月-60月之间,中位随访时间为33月。全部186人的中位生存期为37.0月(95%CI：32.3-41.7月)。全体患者1年生存率为91.4%,3年生存率为53.2%,5年生存率为40.3%。CCNB2蛋白高表达组与CCNB2蛋白低表达组的中位生存期分别为17.0月(95%CI：16.3-17.7月)和40.0月(95%CI：34.9-45.1月),具有明显统计学差异(P=0.000)。通过逐一的单因素分析,我们发现：年龄(P=0.953)、吸烟史(P=0.585)、分化程度(P=0.551)、病理类型(P=0.987)四个因素对非小细胞肺癌患者的总生存期无明显影响。女性(P=0.048)患者生存期可能比男性更长,但是P值为0.048与临界值P=0.05很接近,不排除假阳性可能,需要进一步扩大样本量来验证。相反,CCNB2蛋白高表达量(P=0.000)、临床分期(P=0.000)、肿瘤大小(T分期)(P=0.000)及局部淋巴结转移情况(N分期)(P=0.000)、否伴有远处转移(M分期)(P=0.000)与预后生存密切相关,结果均具有明显统计学差异。多因素COX回归分析结果提示,CCNB2蛋白表达水平(HR=2.27,95%CI: 1.40-3.69,p=0.001)、T分期(HR=1.87,95%CI:1.23-2.84, P=0.003)、N分期(HR=2.16,95%CI:1.10-4.23, P=0.025)、M分期(HR=2.95,95%CI:1.45-6.01,P=0.003)是患者总生存期的独立预后因素。3.2 CCNB2高、低表达亚群总生存期的分层分析根据性别、年龄、吸烟史、病理类型、分化程度、临床分期、T分期、N分期、M分期的分层分析发现中,仅高龄亚组(大于等于50岁群体)(P=0.570)、高分化亚组(P=0.084)、“N0-N1期”亚组(P=0.165)的患者,其CCNB2高表达组与低表达组总生存期无明显差异,其余亚组两者的总生存期均有统计学差异。3.3 M0期病人的总生存期分析及预后因素分析本研究的随访截止日期为2014年12月31日,随访的时间介于5月-60月之间,中位随访时间为34月。全部171人的中位生存期为40.0月(95%CI：34.9-45.1月)。CCNB2蛋白高表达组与CCNB2蛋白低表达组的中位生存期分别为31.0月(95%CI：27.8-34.2月)和48.9月(95%CI：45.5-52.2月),具有明显统计学差异(P=0.000)。通过单因素分析发现：CCNB2蛋白高表达量(P=0.000)、临床分期(P=0.000)、肿瘤大小(T分期)(P=0.000)及局部淋巴结转移情况(N分期)(P=0.000)则与患者预后密切相关。多因素COX回归分析结果提示,CCNB2蛋白表达上调(HR=2.25,95%CI: 1.38-3.66, P=0.001)、T分期(HR=1.87,95%CI:1.23-2.84, P=0.003)、N分期(HR=2.16,95%CI:1.10-4.23, P=0.025)是患者总生存期的独立预后因素。结论1.CCNB2在NSCLC的发生发展中可能扮演重要作用。2.CCNB2 mRNA在NSCLC患者的癌组织中表达水平较癌旁组织显著升高。3.CCNB2蛋白过表达水平与肿瘤分化程度、肿瘤大小、淋巴转移、远处转移和临床分期有明显关系;4.对于全组186例患者,CCNB2蛋白高表达组比CCNB2蛋白低表达组的中位生存期短；CCNB2蛋白、肿瘤大小(T分期)、局部淋巴结转移情况(N分期)、远处转移(M分期)可以作为非小细胞肺癌患者总生存期的独立预后因素。5.根据性别、年龄、吸烟史、病理类型、分化程度、临床分期、T分期、N分期、M分期的分层分析发现中,仅高龄亚组(大于等于50岁群体)(P=0.570)、高分化亚组(P=0.084)、“NO-N1期”亚组(P=0.165)的患者,其CCNB2蛋白高表达组与低表达组总生存期无明显差异,其余亚组两者的总生存期均有统计学差异。6.对于171例MO期患者,CCNB2蛋白高表达组比CCNB2蛋白低表达组的中位生存期短；CCNB2蛋白、肿瘤大小(T分期)、局部淋巴结转移情况(N分期)、是患者总生存期的独立预后因素。