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目的:
卵巢癌是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一,因缺乏有效的早期诊断方法,诊断时多为晚期,大量国内外临床资料显示,卵巢癌患者的五年生存率仅为25%~30%,随着近代宫颈癌及子宫内膜癌诊治进展,卵巢癌已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤,究其原因,是70%以上的卵巢癌诊断时,病变范围已超出卵巢,发生转移。卵巢恶性肿瘤的治疗原则是手术为主,辅以化疗、放疗及其他综合治疗,其中化疗为主要的辅助治疗手段。因卵巢恶性肿瘤对化疗较敏感,即使已广泛转移也能取得一定疗效,既可用于复发,也可用于术后有残留癌灶患者,可缓解症状延长存活期。
但是近年来随着卵巢癌化疗耐药问题的不断出现,严重影响了卵巢癌的治疗效果。大量对卵巢癌细胞系和动物模型的研究已经证明,PI3K/AKT信号通路异常活化与卵巢癌化疗耐药有关,抑制该通路可以明显增加化疗药物的抗肿瘤效应,而且副作用亦有所减小。临床和实验研究证明wortmannin是PI3K的特异性抑制剂,它能间接抑制痛细胞的讯息传递,使得癌细胞无法生长而让肿瘤变小或消失。本实验拟观察wormannin对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响,分析其抑制肿瘤生长的机制。
本实验通过检测经PI3K抑制剂wortmannin作用后卵巢癌细胞系CAOV3中凋亡调控因子(survivin蛋白)和半胱氨酸门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3蛋白)的表达及变化情况,初步探究PI3K/AKT信号传导通路影响卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制,为卵巢癌的治疗提供新的实验依据。
方法:
1、实验方法
应用western blot方法检测经不同浓度wortmannin(0、100、300、500nmol/L)作用以及作用不同时间(0、6、12、36h)后,卵巢癌细胞系CAOV3中survivin蛋白及caspase-3蛋白的表达及变化趋势,同时检测二者之间的相关性。
2、统计学方法
实验数据采用SPSS13.0统计软件进行独立样本t检验及相关分析,P<0.05表示差异有统计学意义;实验数据取三次独立实验数据的平均值。
结果:
1、药物浓度梯度实验:卵巢癌细胞系CAOV3经不同浓度wortmannin作用后,caspase-3蛋白随着wortmannin作用浓度增加呈递增式表达,而survivin蛋白随着wortmannin作用浓度增加表达则逐渐减弱,100nmol/L wortmannin组survivin蛋白的表达强度约为0nmol/L组的1/2,两组之间的统计学差异较survivin蛋白其他相邻组间差异更为明显(P<0.01)。
2、药物时间梯度实验:卵巢癌细胞系CAOV3经300nmol/L wortmannin作用不同时间后,caspase-3蛋白随着wortmannin作用时间延长呈递增式表达,作用累及12h时,caspase-3蛋白的表达强度约为0h的2.5倍;Survivin蛋白则随着wortmannin作用时间延长表达逐渐减弱。
3、caspase-3与survivin蛋白在卵巢癌细胞系CAOV3中的表达具有对应性,随着wortmannin作用浓度增加、作用时间延长,caspase-3蛋白表达上调,survivin蛋白表达下调。
结论:
在卵巢癌细胞系CAOV3中,wortmannin增强凋亡蛋白caspase-3表达,且与作用浓度及作用时间呈正相关;wortmannin抑制存活蛋白survivin表达,且与作用浓度及作用时间呈负相关;应用wortmannin后,卵巢癌细胞系CAOV3的survivin蛋白和caspase-3蛋白的表达变化呈负相关;wortmannin通过抑制survivin蛋白表达、增强caspase-3蛋白表达,从而抑制卵巢癌的发生发展。