毒死蜱诱导西花蓟马差异蛋白分析及细胞色素P450CYP6基因克隆与发烟施药技术研究

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西花蓟马Frankliniella ocddentalis (Pergande)是世界上重要的农作物害虫和检疫对象,我国于2003年在北京首次发现。其体型小,隐匿性强,繁殖方式独特,抗药性发展迅速,为研究抗药性形成机制与有效防治带来了较大困难,本研究通过采用“药膜+浸叶”法,对西花蓟马进行室内抗性筛选,并利用iTRAQ技术结合LC-MS/MS技术分析敏感品系西花蓟马与抗性品系的差异蛋白质组,选取其中差异表达蛋白编码基因细胞色素P450CYP6进行克隆与表达;并对热力发烟施药技术防治西花蓟马进行了相关研究,结果如下:1.采用“药膜+浸叶”法对西花蓟马室内群体进行抗毒死蜱筛选,测定西花蓟马对毒死蜱的敏感水平,利用毒死蜱LC75处理西花蓟马二龄若虫,在建成一定规模的群体后,再次生物测定重复上述过程,共处理19次,西花蓟马对毒死蜱的敏感性下降39倍。2.本研究以敏感品系的西花蓟马为对照组,分别收集敏感品系和抗性品系的西花蓟马各300头,提取蛋白,并进行iTRAQ标记和LC-MS/MS分析鉴定。共鉴定出773个蛋白质,其中的差异表达的蛋白为20个。差异蛋白主要有连接、催化、转运及酶调节等分子功能;主要参与了代谢、发育、生物调节、应激反应等生物过程;绝大部分蛋白质处于细胞、细胞器、高分子中,有极少部分存在于胞外区。这些差异蛋白还参与了各种通道途径,如代谢途径、次级代谢产物的生物合成、氧化磷酸化等。通过分析差异蛋白,参照NCBI相应序列,设计引物,克隆西花蓟马细胞色素P450CYP6基因,并进行外源表达。3.本研究选取不同配比的热雾剂,以不同的溶剂混合,并选用不同喷药方式测定了热力烟雾机对西花蓟马的室内防效。结果表明,烟雾防治效果要远远高于常规水雾防治效果,最高防治效果能达到95%。热雾剂以药液:溶剂:水为1:3:6比例配制时雾滴分布均匀,一个视野内数目多,利于扩散弥漫。
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