【摘 要】
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猕猴桃是一种重要的水果,贵州大量种植猕猴桃,近年来逐渐发展成为重点精品水果之一。溃疡病是制约猕猴桃产业发展的重要因素之一,该病害是由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)引起的细菌性病害,由于其传播快、危害大、防治困难等特点,对猕猴桃产业造成了严重的影响。为明确贵州Psa的群体遗传结构,为猕猴桃溃疡病科学防控提供理论支撑,本研究通
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猕猴桃是一种重要的水果,贵州大量种植猕猴桃,近年来逐渐发展成为重点精品水果之一。溃疡病是制约猕猴桃产业发展的重要因素之一,该病害是由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)引起的细菌性病害,由于其传播快、危害大、防治困难等特点,对猕猴桃产业造成了严重的影响。为明确贵州Psa的群体遗传结构,为猕猴桃溃疡病科学防控提供理论支撑,本研究通过采集贵州猕猴桃溃疡病标样,进行Psa的分离、纯化、鉴定及保存,对分离到的Psa开展生物型鉴定和致病力测定;同时采用模拟PCR,对Psa全基因组信息进行研究,优化MLVA分型方法;采用优化后的MLVA分型的方法对贵州Psa进行群体遗传结构分析。取得了如下结果:1.在贵阳市、六盘水市和毕节市等8个市(州)的31个县(市、区),48个镇(乡、街道),74个果园,采集了700余份溃疡病样,采用划线分离法对采集病样进行Psa分离,用特异性引物F1/R2及16S测序的方法进行鉴定并保存,共收集到Psa 377株,其中2株来自陕西省周至县,375株来自贵州猕猴桃产区。2.对377株Psa使用特异性引物P0F/P6R进行生物型鉴定,结果表明377株Psa均为猕猴桃溃疡病菌biovar3,采用枝条离体接种法对377株Psa进行致病力测定,结果显示接种后枝条的平均病斑长度在0.21-1.52 cm之间,方差分析显示致病力与地理来源和寄主品种无相关性。3.采用模拟PCR方法,以报道的Psa群体遗传结构MLVA分型34对引物,对Gen Bank下载的129株Psa菌株全基因组信息进行分析研究,通过对MLVA数据分析筛选出22对引物。以辛普森指数为标准筛选出6对MLVA引物组合,其多位点基因型数为52,辛普森指数为0.9677978,与22对引物组合下的多位点基因型数和辛普森指数相同。基于6对引物组合MLVA数据的UPGMA聚类树与22对引物MLVA数据的UPGMA聚类树大致相同,明确了Psa-10等6对引物的组合可代表22对引物用于Psa的群体遗传结构研究。4.使用筛选的6对MLVA引物组合,对377株Psa进行群体遗传结构分析,结果表明:贵州Psa可分为9个类群,其中类群4菌株数量最多,为211株,类群6菌株数量次之,为102株,这两个类群广泛分布于贵州各猕猴桃产区,类群4为全球流行群体,也是最早传入贵州的类群,其余7个类群数量较少,分别为类群1:9株,类群2:4株,类群3:7株,类群5:9株,类群7:6株,类群8:16株,类群9:11株。5.对UPGMA聚类树进行分析发现,贵州Psa主要通过花粉和苗木携带进行远距离传播。建议在猕猴桃溃疡病的防控中不仅要规范果园管理,减少Psa在果园间的近距离传播,更要加强市场上花粉和苗木的Psa检测,防止Psa的远距离传播。
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