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在猪精液冷冻保存过程中,冷冻引起精子结构和功能的变化,影响精子的活力和受精能力,导致冷冻精液人工授精配种受胎率降低、窝产仔数减少。与新鲜精液人工授精相比,猪冷冻精液人工授精的使用率仅1%。尽管在冷冻稀释液成分及冷冻处理程序等方面做了大量研究,但冷冻损伤的分子机制仍不清楚。研究表明,冷冻能够造成精子DNA甲基化、组蛋白乙酰化等表观遗传学变化,但存在争议。在精子发生、胚胎发生过程中,表观遗传修饰对精子功能的维持有着重要作用,且表观修饰异常同雄性不育有着紧密联系。冷冻是否引起猪精子表观遗传学的变化尚未见报道。因此,本试验探讨猪精子冷冻过程中精子的表观遗传变化,为进一步优化猪冷冻保存稀释液、改善猪冷冻精液的保存效果提供科学的依据。本研究通过选取正常繁殖能力长白公猪精液,提取三个不同试验组：新鲜组、程序冷冻组(无LEY组)、抗冷冻剂组(LEY组、3%甘油组、250mmol /L海藻糖组、1mmol/L谷胱甘肽组)精子中Toltal RNA,采用qRT-PCR和ELISA技术检测冷冻前后与表观遗传相关基因(Dnmt3a、Dnmt3b、Jhdm2a、Kat8、Prm1、Prm2和IGF2)的mRNA水平及蛋白质水平的表达情况。结果如下：1、无LEY组中的精子活率显著低于抗冷冻剂组,而活力同LEY组无显著性差异；抗冷冻剂组中,精子活率、活力在3%甘油组中最高,且与其它处理组相比具有显著性差异。2、qRT-PCR结果表明猪精子在冷冻前后表观遗传相关基因表达水平存在差异。且处理组中基因相对表达量显著低于新鲜样；在各个基因中,无LEY组中基因相对表达水平最低。3、ELISA分析表明,所有检测蛋白在新鲜组同LEY组间存在显著差异。Dnmt3a、 Dnmt3b、Jhdm2a及Prm蛋白在新鲜组中的表达水平同无LEY组和1mmol/L谷胱甘肽组间差异显著；Kat8、Prm、IGF2及Jhdm2a蛋白在新鲜组与250mmol/L海藻糖组中存在显著性差异。新鲜组中Jhdm2a蛋白表达量同其他冷冻处理组都存在显著性差异。本研究结果证实冷冻能够引起猪精子中表观遗传相关基因在mRNA表达水平和蛋白质表达水平的变化。